Development of a Screening System Using Mouse-model for Chemical Modifiers of Radiation Response

使用小鼠模型开发辐射响应化学修饰剂筛选系统

基本信息

批准号：
19K08130
负责人：
笹井啓資
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Edaravoneの放射線防護効果のin vitroからin vivoまでのアッセイを通して、薬剤による放射線修飾効果測定システムを確立することを目的とし、本年度は情報収集、論文作成に集中した。in vitroでは正常細胞モデルとしてC3Hマウス由来線維芽細胞2種類を用いた。A9(JCRB供与)はコロニー形成能を有し、一方C3H/10T1/2-clone 8（clone 8　JCRB供与）はコロニー形成試験不能であった。腫瘍細胞はC3Hマウス由来SCCVII腫瘍を用いた。A9およびSCCVIIによるコロニー形成試験では0.1mM 4時間暴露後の放射線防護効果は認めなかった。次にAssayキットを用いた細胞増殖能試験では0.1mM4時間暴露はSCCVII、A9には放射線防護効果は認めないが、clone 8では照射５日目および７日目で防護効果を認めた。また同細胞に対して0.02mM以上で防護効果が認められた。clone 8およびSCCVIIに対するGSH、SOD様活性に対する影響をそれぞれAssayキットを用いて求めた。GSHは同一細胞数ではSCCVII細胞がclone 8に対して有意に活性が高かったが、0.1mM4時間暴露では効果を認めなかった。またSOD様活性でも0.1mM4時間暴露による効果は認めなかった。in vivoではedaravone100 mg/kgを照射30分前に8週齢C3H雌マウスに腹腔内投与した。照射後3.5日で安楽死させた後、空腸を摘出し組織学的変化を評価した。照射後の平均生存陰窩数は投与群0.29 (SE:0.021)とコントロール0.036 (0.035)に対して有意に多かった。Cleaved caspase 3 免疫染色によるアポトーシス細胞評価はで、コントロール6.9% (SE:0.88)に対して投与群1.2% (0.38)と有意に少なかった。

目的是建立一个系统，以通过体外来衡量用药物进行辐射修饰的有效性，从而在体内测定Edaravone的辐射保护效果，今年我们专注于信息收集和纸张准备。在体外，将源自C3H小鼠衍生的两种类型的成纤维细胞用作正常细胞模型。 A9（JCRB供体）具有菌落形成能力，而C3H/10T1/2-CLONE 8（Clone 8 JCRB供体）无法群体形成测试。肿瘤细胞是源自C3H小鼠的SCCVII肿瘤。使用A9和SCCVII进行菌落形成测试，在0.1 mm处暴露4小时后没有显示任何辐射保护效果。接下来，在使用测定试剂盒的细胞增殖测试中，在SCVII中未观察到0.1 mM暴露4小时，而A9没有显示出任何辐射保护效果，但是克隆人8对辐射的第5天和第7天表现出保护作用。此外，在0.02 mm或更高的温度下，同一细胞观察到了保护作用。使用测定试剂盒确定对GSH和SOD样活动对克隆8和SCCII的影响。 GSH在具有相同数量的细胞的SCVII细胞中显着活跃，但是在暴露于0.1 mm的4小时时未观察到任何作用。此外，即使有类似SOD的活性，也没有从0.1 mm暴露4小时观察到效果。在体内，在辐照前30分钟将Edaravone 100 mg/kg腹膜内腹膜内给予8周大的C3H雌性小鼠。安乐死后3.5天后，去除空肠并评估组织学变化。辐照后存活的隐窝的平均数量明显高于管理组0.29组（SE：0.021）和对照0.036（0.035）的平均地下室。使用裂解的caspase 3免疫染色对凋亡细胞的评估显着低于6.9％的对照（SE：0.88），而该组中的1.2％（0.38）。