糖鎖遺伝子の細胞導入による癌転移能のmodulationの試み

尝试通过将糖链基因引入细胞来调节癌症转移潜力

• 批准号: 05152076
• 负责人: 谷口 直之
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152076/
• 关键词: 癌転移能; 細胞接着; N-アセチルグルコサミン転移酵素III; マウスメラノーマ細胞; レクチン; 糖鎖構造

細胞表面の糖鎖の構造は、細胞間認識あるいは細胞接着などに重要な役目をはたしている。癌細胞においては、この表面の糖鎖構造、特に枝分かれ構造が多くなった糖タンパク質糖鎖の出現と転移能との間に深い関連があることが明らかになってきた。我々は、酵素の精製、クローニングに成功したN-アセチルグルコサミン転移酵素III(GnT-III)の遺伝子を、マウスメラノーマ細胞株B16F1に導入してGnT-IIIをpermanentに発現するmutant細胞株を樹立し、これらの人工的に細胞表面糖鎖構造を変化させた細胞をマウスに静注し、各細胞株の転移能を検討した。GnT-III遺伝子による糖タンパク質糖鎖の変化をレクチンブロット解析したところ、GnT-III遺伝子導入細胞では、GnT-IIIの反応生成物であるbisecting GlcNAc構造を認識するE-PHAレクチンの反応性増加が認められていたことから、GnT-III導入は明らかに細胞糖鎖を変化させることが判明した。さらにGnT-IIIの遺伝子が導入されて活性の高い細胞は、GnT-IIIの活性が発現していない細胞に比較して、有意にその転移能が低下していた。このGnT-III発現細胞と非発現細胞の間で、明らかな細胞増殖能の変化などは認められなかったことから、この癌転移実験系ではGnT-IIIが細胞表面の糖鎖構造を変化させ癌転移能を抑制したものと考えられる。

细胞表面的糖链结构在细胞间识别和细胞粘附中起着重要作用。在癌细胞中，人们已经清楚，表面糖链结构，特别是具有许多分支结构的糖蛋白糖链的出现，与转移潜力之间存在着深刻的关系。我们引入了 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 III (GnT-III) 基因，并成功将其纯化并克隆到小鼠黑色素瘤细胞系 B16F1 中，以建立永久表达 GnT-III 的突变细胞系，这些细胞具有人工改变的细胞表面。将糖链结构静脉注射到小鼠体内，并检查每种细胞系的转移潜力。对 GnT-III 基因引起的糖蛋白糖链变化的凝集素印迹分析表明，在 GnT-III 基因转染的细胞中，E-PHA 凝集素的反应性可识别平分 GlcNAc 结构，而 GlcNAc 结构是 GnT-III 基因的反应产物。 III，增加。这些结果表明GnT-III的引入明显改变了细胞糖链。此外，导入GnT-III基因并具有高活性的细胞比不表达GnT-III活性的细胞具有显着较低的转移潜力。由于GnT-III表达细胞和非表达细胞之间没有观察到细胞增殖能力的明显变化，因此认为GnT-III改变了细胞表面的糖链结构，并在该癌症转移实验系统中引起癌症转移。潜力被压制。

项目成果

J.Gu: "Purification and characterization of UDP-N-acetylglucosamine:α-6-D-mannoside β1-6N-acetylglucosaminy ltransferase(N-acetylglucosaminyltransferase V)from a human lung cance cell line." J.Biochem.113. 614-619 (1993)

J.Gu：“来自人肺癌细胞系的 UDP-N-乙酰氨基葡萄糖：α-6-D-甘露糖苷 β1-6N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 V）的纯化和表征。J.Biochem.113。” -619 (1993)

E.Miyoshi: "Selective suppression of N-acetylglucosaminyltransferase III activity in a human hepatoblastoma cell line transfected with hepatitis B virus." Cancer Res.54. (1994)

E.Miyoshi：“在转染乙型肝炎病毒的人肝母细胞瘤细胞系中选择性抑制 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 III 活性。”