糖鎖遺伝子の特異性

聚糖基因的特异性

• 批准号: 05274103
• 负责人: 谷口 直之
• 金额: $ 111.62万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1996
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05274103/
• 关键词: 糖鎖遺伝子; 細胞導入; 遺伝子クローニング; α1-6フコシルトランスフェラーゼ; シアリルルイスX; ミドカイン; 糖鎖; 糖タンパク質; GnT-III; ベイシジン; シアル酸転移酵素; 癌細胞; Gal転移酵素; トランスジェニックマウス; シアリダーゼ; T細胞受容体

本研究では、糖鎖遺伝子であるGnT-III遺伝子の細胞導入によりGnT-IIIの産物であるbisecting GlcNAcが糖タンパク質に付加されることにより、細胞膜に存在する糖タンパク質の選別輸送が抑制され、選別輸送が反対方向へおこり、ゴルジやリソソームに蓄積された。しかし、リソソームに存在する糖タンパク質や、分泌性の糖タンパク質の選別輸送は障害されなかった。また、PC12細胞では、神経成長因子NGFのレセプターであるTrkAの糖鎖が改変され、二量体形成やクラスタリングが抑制され、細胞核への増殖シグナルが抑制され、分化が抑制された。がんの転移に密接な関係があり、転移がん細胞で著しく発現するGnT-V遺伝子の上流解析をおこない、プロトオンコジーンの転写因子Ets-1がプロモーター活性をもつことをあきらかにした。また、新しいシアル酸転移酵素遺伝子のクローニングに成功した。新しいα1-6 Fucosyl transferaseをヒトおよびブタ組織から分離精製に成功し、その遺伝子クローニングに成功した。ルイスXおよびシアリルルイスXの生合成機構と人類遺伝学的な分布をあきらかにした。また、細胞間の接着に重要なヘパリン結合性成長因子であるミドカインのヘパラン結合の分子機構と細胞生物学的意義を明らかにした。このように本研究では、糖鎖遺伝子を細胞に導入することにより、糖鎖遺伝子を発現させ、その産物である糖転移酵素を過剰発現させることにより、細胞内や細胞表面の糖タンパク質や糖脂質の糖鎖を改変させ、それらの新たに生成した糖鎖のもつ意義を明らかにすることに成功した。また、これらの糖鎖遺伝子の制御機構、細胞生物学的な意義、とくに細胞増殖、細胞接着、細胞間認識機構における糖鎖遺伝子のかかわりを解明した。

在这项研究中，我们证明，通过将GnT-III基因（一种聚糖基因）引入细胞中，将GnT-III的产物平分GlcNAc添加到糖蛋白中，从而抑制细胞中存在的糖蛋白的选择性转运转运发生在相反的方向并在高尔基体和溶酶体中积累。然而，溶酶体糖蛋白和分泌糖蛋白的选择性转运并未受损。此外，在PC12细胞中，神经生长因子NGF受体TrkA的糖链被修饰，抑制二聚体形成和聚集，抑制细胞核的增殖信号，并抑制分化。我们对与癌症转移密切相关、在转移性癌细胞中显着表达的GnT-V基因进行了上游分析，发现原癌基因转录因子Ets-1具有启动子活性。我们还成功克隆了一个新的唾液酸转移酶基因。我们成功地从人和猪组织中分离纯化出一种新的α1-6岩藻糖基转移酶，并成功克隆了其基因。阐明了Lewis X和唾液酸化Lewis X的生物合成机制和人类遗传分布。此外，我们阐明了米多因子（midokine）与肝素结合的分子机制和细胞生物学意义，米多因子是细胞间粘附的重要肝素结合生长因子。通过这种方式，在这项研究中，我们将糖链基因引入细胞中，表达糖链基因，并过度表达其产物糖基转移酶，我们成功地修饰了人体的糖链，并阐明了这些新生成的糖链的意义。 。我们还阐明了这些糖链基因的控制机制和细胞生物学意义，特别是它们在细胞增殖、细胞粘附和细胞间识别机制中的参与。

项目成果

S.Yamashiro: "Substrate specificity of β1, 4-N-acetylgalalactosaminyltransferase in vitro and in cDNA-transfected cells. GM2/GD2 synthase efficientyl generates asialo-GM2 in certain cells." J.Biol.Chem.270. 6149-6155 (1995)

S.Yamashiro：“β1, 4-N-乙酰半乳糖氨基转移酶在体外和 cDNA 转染细胞中的底物特异性。GM2/GD2 合酶在某些细胞中有效生成 asialo-GM2。”J.Biol.Chem.270（ 1995)

Makino,Y.: "Extrathymic development of V α 14 positive T cells." J.Exp.Med.177. 1399-1408 (1993)

Makino, Y.：“V α 14 阳性 T 细胞的胸腺外发育。”J.Exp.Med.177（1993）。

Huang,R.-P.: "Embigin,a member of the immunoglobulin superfamily expressed in embryonic cells,enhances cell-substratum adhesion" Dev.Biol.155. 307-314 (1993)

Huang,R.-P.：“Embigin，胚胎细胞中表达的免疫球蛋白超家族的成员，增强细胞与基质的粘附”Dev.Biol.155。

Naoya Kojima: "Induction of cholinergic differentiation with neurite sprouting by de novo biosynthsis and expression of GD3 and b-series gangliosides in Neuro2a cells" J.Biol.Chem.269. 30451-30456 (1994)

Naoya Kojima：“通过从头生物合成和在 Neuro2a 细胞中表达 GD3 和 b 系列神经节苷脂来诱导神经突萌芽的胆碱能分化”J.Biol.Chem.269。

M.Yoshimura: "Cell Spreading in Colo 201 by Staurosporin ls α3β1 Integrinmediated with Tyrosine Phosphorvlation of Src and Tensin." J.Biol.Chem.270. 2298-2304 (1995)

M. Yoshimura：“星孢菌素 ls α3β1 整合素介导 Src 和张力蛋白酪氨酸磷酸化在 Colo 201 中的细胞扩散。”J.Biol.Chem.270 (1995)。