癌化におけるス-パ-オキサイドの役割

超氧化物在致癌过程中的作用

• 批准号: 02152068
• 负责人: 谷口 直之
• 金额: $ 5.89万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02152068/
• 关键词: MnーSuperoxide Dismutase; Ovarian Cancer; Tumor marker; Tumor Necrosis Factor; Serum

0_2^ーの癌化における役割を検討する目的で、Superoxide Dismutase(SOD)のタンパクおよび遺伝子レベルでの発現を検索した。SODは0_2^ーを消去する酵素で、そのアイソザイムの1つであるMnーSODはミトコンドリアマトリックスに存在し、サイトカインとの関連においても注目されている。今回、ヒトMnーSODの大量精製法を確立し、結晶化に成功した。これを用いてモノクロ-ン抗体を作製したところそのエピト-プはC末端近傍のペプチドに存在した。また、本酵素はnativeにはtetramerとして存在することを明らかにした。ヒト癌組織での現現をELISAや免疫組織染色により観察すると、肝癌、卵巣癌、急性骨髄性白血病などで発現が著しい。ヒトでは血清にも出現し、上皮性卵巣癌の良いマ-カ-となる。卵巣癌患者の60%にMnーSODは高値を示し、従来用いられているCAー125に比し優れた腫瘍マ-カ-であることが明らかになった。また、ヒト上皮性卵巣癌組織でもmRNAの増大がみられた。また、ラットでも肝癌自然発症ラット(LECラット)では二相性のmRNAの発現がみられた。ラットMnーSODに対するポリクロ-ン抗体を作製し、免疫組織学的検討を行い、癌組織における発現をみた。MnーSODの遺伝子レベルおよびタンパクレベルでの発現機構を知るため、培養細胞でのTNFーαによる誘導を調べた。卵巣癌、急性骨髄性白血病、肺癌などの細胞株ではTNFーαが著しくMnーSODを誘導したが、Cu,ZnーSODの誘導はみられなかった。また、TNFに耐性な癌細胞では、既にTNF未処理で十分発現されており誘導はみられなかった。MnーSODの発現はILー1やTNFを分泌する癌細胞やマクロファ-ジの活性化により産生する0_2^ーの産生にadaptiveに発現するものと考えられる。

为了研究0_2^在癌症中的作用，我们搜索了超氧化物歧化酶（SOD）的蛋白质和基因表达。 SOD是一种擦除0_2^ - 的酶，在线粒体基质中发现了其同工酶之一Mn-SOD，并且在与细胞因子的关联时引起了人们的注意。这次，建立了一种大规模纯化方法，并成功地结晶了。使用此过程，制备了单克隆抗体，并发现表位存在于C末端附近的肽中。还揭示了该酶以天然形式作为四聚体存在。当通过ELISA或免疫组织化学染色观察到人类癌组织中的表现时，它在肝癌，卵巢癌，急性髓样白血病等中很突出。它也出现在人类的血清中，使其成为上皮卵巢癌的良好麦芽糖。在60％的卵巢癌患者中，MN-SOD较高，表明它优于常规CA-125肿瘤。另外，在人上皮卵巢癌组织中也观察到mRNA增加。另外，在自发肝癌（LEC大鼠）的大鼠中观察到双相mRNA表达。制备了针对大鼠MN-SOD的多克隆抗体，在癌症组织中进行了免疫组织学检查。为了理解MN-SOD的基因和蛋白水平表达机制，研究了TNF-α在培养细胞中的诱导。 TNF-α在卵巢癌，急性髓样白血病和肺癌等细胞系中显着诱导MN-SOD，但未观察到Cu或Zn-SOD的诱导。此外，在对TNF抗性的癌细胞中，未经TNF治疗的细胞已经完全表达，并且未观察到诱导。人们认为，Mn-SOD的表达在0_2^ - 的产生中是自适应表达的，该表达是通过分泌IL-1和TNF以及巨噬细胞的激活而产生的。

项目成果

Akai,F.: "Immunocytochemical localization of manganese superoxide dismutase (MnーSOD) in the hippocampus of the rat." Neuroscince Lett.115. 19-23 (1990)

Akai, F.：“大鼠海马中锰超氧化物歧化酶 (Mn-SOD) 的免疫细胞化学定位。Neuroscence Lett.115 (1990)。

Kawaguchi,T.: "Stimulation of Mnーsuperoxide dismutase expression by tumor necrosis factorーα:Quantitative determination of MnーSOD protein levels in TNFーresistant and sensitive cells by ELISA." Biochem.Biophys.Res.Commun.171. 1378-1386 (1990)

Kawaguchi, T.：“肿瘤坏死因子-α 刺激锰超氧化物歧化酶表达：通过 ELISA 定量测定 TNF 抗性和敏感细胞中的 Mn-SOD 蛋白水平。”1378。 -1386 (1990)

Taniguchi,N.: "Clinical significances of superoxide dismutases:Changes in aging,diabetes,ischemia and cancer." Advance in Clinical Chemistry. 29. (1991)

Taniguchi, N.：“超氧化物歧化酶的临床意义：衰老、糖尿病、缺血和癌症的变化。”

Deutsch,H.F.: "Preparation of human manganese superoxide dismutase TriーPhaseーpartitioning and preliminary crystallographic data." J.Mol.Biol.218. (1991)

Deutsch, H.F.：“人锰超氧化物歧化酶三相分配的制备和初步晶体学数据。”J.Mol.Biol.218（1991）。