核内癌遺伝子mafの機能と発現

核癌基因maf的功能和表达

基本信息

批准号：
03152029
负责人：
西澤誠
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152029/
关键词：
癌遺伝子転写制御因子ロイシンジッパ-構造

项目摘要

今年度は核内癌遺伝子産物Mafの認識するDNA配列を決定することに成功した。Maf遺伝子産物は細胞内で核に局在して存在することやC末端部分に存在するロイシンジッパ-構造などの構造上の特徴からその本体は転写制御因子であると考えられた。今回大腸菌でそのDNA結合ドメインのみを大量に産生し、これを用いてアフィニィティ-カラムおよびゲルシフト法とPCRを組み合わせた方法によりランダムなDNA配列から結合するDNAを濃縮し、塩基配列を決定した。決定された結合配列は13塩基対の長さであり、他のいくつかのロイシンジッパ-構造を持つ転写制御因子で報告されているように回文構造をとっていた。かねてからの懸案であった認識配列が決定されたことで今後の展開が期待できるようになった。現在はMaf遺伝子産物の転写活性化能を検討している。また決定された認識配列が比較的長いことを利用して、DNAデ-タベ-スから標的遺伝子の候補を検索したので、これらの候補が実際にMaf蛋白質で発現が制御されるかどうか検討中である。今年度はさらにmaf関連遺伝子の解析が進み、特にmafKと新たに見いだされたmafFというふたつの関連遺伝子産物はcーMafの転写活性化ドメイント思われる部分を欠き、Maf産物の半分以下のアミノ酸残基数しか持たない構造をしていることが判明した。これらの産物もMaf産物と同じDMA配列に結合することは確認されたが、その構造からしてこれらは転写活性化の補因子としてあるいは抑制因子として機能すると予想された。特に転写抑制に働くとすれば生体ではいわゆる癌抑制遺伝子として機能していることも考えられ、現在これらの可能性に関して検証を進めている。

今年，我们成功确定了核癌基因产物Maf识别的DNA序列。 Maf 基因产物因其结构特征而被认为是转录调节因子，例如其位于细胞核中以及其 C 末端存在亮氨酸拉链结构。这次，我们仅在大肠杆菌中大量生产DNA结合结构域，通过结合亲和柱、凝胶迁移法和PCR的方法，从随机DNA序列中浓缩结合的DNA，并确定碱基序列。确定的结合序列长 13 个碱基对，并具有回文结构，如其他几种亮氨酸拉链结构转录调节因子的报道。既然识别序列已经确定，这已经是一个悬而未决的问题一段时间了，我们现在可以期待未来的发展。目前，我们正在研究Maf基因产物的转录激活能力。我们还使用相对较长的确定的识别序列在DNA数据库中搜索目标基因候选物，目前正在研究这些候选物的表达是否确实受到Maf蛋白的调节。今年，对maf相关基因的进一步分析取得了进展，特别是mafK和新发现的mafF这两个相关基因产物，缺少了看似c-Maf转录激活结构域的部分，且有不到一半Maf 产品的氨基酸含量表明，它的结构只有很少的残基。经证实，这些产品也与 Maf 产品结合相同的 DMA 序列，并且根据其结构，预计它们将充当转录激活的辅助因子或阻遏物。特别是，如果它能够抑制转录，那么它有可能在生物体中作为所谓的肿瘤抑制基因发挥作用，我们目前正在研究这种可能性。