高発癌性遺伝病の修復欠損要因と修復遺伝子の解析

高致癌性遗传病修复缺陷因素及修复基因分析

• 批准号: 01010040
• 负责人: 藤原 美定
• 金额: $ 5.95万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01010040/
• 关键词: 高発癌性遺伝病; 色素性乾皮症; DNA修復; 修復遺伝子; 修復タンパク; DNA損傷特異抗体; 突然変異; 発癌

1.色素性乾皮症(XP)の相補遺伝子クローニングと蛋白の解析。XPーA群を部分相補するマウス・ヒトcDNAが多数のλとプラスミドにクローニンクできた。その中1.0と1.3kb XPーAcDNAは新遺伝子で215アミノ酸の中性蛋白(25KDa)をコードした。このXPーAcDNAによるサザン分析はゲノム遺伝子(9q)の欠失などの大変異はなく、多数A群では第3イントロンのスプライス受容部位のG→C点尖然変異が発見され、ノザン分析でmRNA転写の異常欠損が見られた。一方、仔牛胸腺から分離カラム組合せで精製したXPーA相補蛋白は42KDaの塩基蛋白で、90KDa複合体としてミクロ注入でXPーA細胞のみでDNA修復を完全回復させた。部分精製XPーC因子は高分子量(160KDa)のDNA親和性の高い蛋白であった。2.XPのDNP修復欠損、突然変異と発癌。全国調査の結果433XP患者が存在した。相補テストの結果、A群105例、C9、D14、E14、F19、G2、Variant(Va)62の計208例が決定され、欧米に比し、A、E、F、Va群が多く、CD群が少ない。全患者の48名が発癌し、ほぼ完全な修復欠損のA、C群は平均10歳の若年性発癌を、中間修復能のEF群とVa群では36ー48歳の平均遅延発癌を示し、よい相関が得られた。LIVによる主要なダイマーと(6ー4)産物に各々特異的単クローン抗体が樹立され、A、C、D群では両損傷修復とも80ー100名欠損し、Va群は高変異性(6ー4)産物のみの部分欠損を示し、発癌したVa群はカフェイン感受性であったので(6ー4)産物が原因損傷と考えられた。シヤトルベクターpZ189のsupF遺伝子のUV突然変異の塩基配列研究はXPーA、C、F群において70%が点突然変異で、TCとCC配列のCではほぼ全部の変異が生じたので(6ー4)産物が発癌性変異にとって重要と考えられた。微底光防御はXP発癌抑制に大変有効である。XPの分子研究が格段に進歩した。多相補群のXP遺伝子と産物および分子修復作用機構の系統的解明が向後の重要な研究展開課題である。

1.着色性干皮病（XP）的互补基因克隆和蛋白质分析。与 XP-A 组部分互补的小鼠和人类 cDNA 被克隆到多个 λ 和质粒中。其中，1.0和1.3kb XP-AcDNA是新基因，编码215个氨基酸的中性蛋白（25KDa）。使用该XP-AcDNA进行Southern分析，发现基因组基因（9q）没有缺失等大的突变，并且在A组中，在第三内含子的剪接受体位点发现了G→C点突变；观察到缺陷。另一方面，使用分离柱组合从小牛胸腺中纯化的XP-A互补蛋白是42KDa碱性蛋白，当以90KDa复合物显微注射时，仅在XP-A细胞中DNA修复完全恢复。部分纯化的 XP-C 因子是一种高分子量 (160KDa) 蛋白质，对 DNA 具有高亲和力。 2. DNP修复XP缺陷、突变和致癌作用。一项全国性调查显示 433 名 XP 患者。补充试验结果，共确定208例，其中A组105例，C9、D14、E14、F19、G2、Variant（Va）组62例。所有患者中有48人患癌，修复缺陷几乎完全的A组和C组平均10岁患癌，而修复能力中等的EF组和Va组平均36岁患癌。至 48 岁之间取得了良好的相关性。建立了针对LIV产生的主要二聚体和(6-4)产物的特异性单克隆抗体，A、C、D组在损伤修复中均损失了80-100个个体，Va组高度突变(6-4)。 4)仅表现出产物部分损失并发展为癌症的Va组对咖啡因敏感，因此产物(6-4)被认为是造成损害的原因。对穿梭载体pZ189的supF基因UV突变的核苷酸序列研究发现，XP-A、C和F组中70%的突变为点突变，几乎所有突变都发生在TC和CC序列的C处(6-4) 该产物被认为对于致癌突变很重要。 Microbasal 光保护对于抑制 XP 致癌作用非常有效。 XP的分子研究取得了重大进展。系统阐明 XP 基因、产物和分子修复机制的多互补组是未来的一个重要研究课题。

项目成果

Kondo,Seiji: "Late onset skin cancers in 2 xeroderma pigmentosum group F siblings and a review of 30 Japanese xeroderma pigmentosum patients in groups D,E and F." Photodermatology. 6. 89-95 (1989)

Kondo,Seiji：“着色性干皮病 F 组的 2 名兄弟姐妹中的迟发性皮肤癌以及对 D、E 和 F 组 30 名日本着色性干皮病患者的回顾。”

Yamamura,Keizo: "Clinical and photobiolgigical characteristics of xeroderma pigmentosum complementation group F and a review of cases from Japan." British Journal of Dermatology. 121. 471-480 (1989)

Yamamura，Keizo：“着色性干皮病互补组 F 的临床和光生物学特征以及日本病例的回顾。”

Satoh,Yoshiaki: "Photoprotection of patients with xeroderma pigmentosum." Dermatoloqy in Five Continents (eds C.E.Orfanos;Verlag-Springer). 749-750 (1988)

Satoh，Yoshiaki：“色素性干皮病患者的光保护。”

Matunaga,Tsukasa: "Base sequence specificity of a monoclonal antibody binding to (6-4)photoproducts." Mutation Research.

Matunaga，Tsukasa：“单克隆抗体与 (6-4) 光产物结合的碱基序列特异性。”

Fujuwara,Yoshisada: "Clustered repair of excisable 4-nitroquinoline-1-oxide adducts in a larger fraction of genomic DNA of xeriderma pigmentosum group C cells." Carcinogenesis. 10. 1777-1785 (1989)

Fujuwara，Yoshisada：“着色干皮病 C 组细胞基因组 DNA 的较大部分中可切除的 4-硝基喹啉-1-氧化物加合物的簇修复。”