D群色素性乾皮症(XPD)タンパクの機能

D 组着色性干皮病 (XPD) 蛋白的功能

• 批准号: 07255205
• 负责人: 藤原 美定
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07255205/
• 关键词: 色素性乾皮症; D群色素性乾皮症(XPD)遺伝子; D群色素性乾皮症(XPD)タンパク質; DNAヘリカーゼ; 抗XPD抗体; 変異

XPD群を相補するXPDcDNAは〜2.4kbで、760アミノ酸残基ペプチド(計算分子量78k, pI7.4; SDS-PAGE分子量〜80kD)をコードし、ヘリカーゼモチーフ(I, Ia, II, III, IV, V, VI)とDNA結合モチーフをもった。XPD-SV40細胞にCMV-promoter下に組み込んだXPDcDNAプラスミドのトランスフェクタントは正常に近いUV抵抗性を得た。XPD蛋白質はATP, Mg^<2+>-依存性の修復ヘリカーゼであり、またTATA配列をもつdhfr断片のRNA合成開始の複合体中にウエスタン分析でXPD蛋白質を検出した。XPD蛋白質C末のArg722〜Gly735を選び、ウサギ抗XPD抗体を作成した。ProteinA精製IgGのXPD抗体はヒト正常とHeLa細胞の細胞抽出液(CE)と核抽出液(NE)の中に80kD XPD蛋白質を認識した。日本人XPDの5株の核抽出液の10-20μg蛋白質をウエスタン分析すると、(i)3株では80kDがHeLaと同じ濃度で検出され、XPDcDNAを3分割したprimersを用いたXPDmRNAのRT-PCRでもすべての断片が期待どおり増幅された(ミスセンス変異)、(ii)1株では長い85kDが1/3量が検出された(スプライス異常または挿入変異の可能性)、(iii)1株のXPD細胞のNEでは抗体が認識する蛋白質が検出されなかった(ナンセンス変異)。

与 XPD 基团互补的 XPD cDNA 约为 2.4 kb，编码带有解旋酶基序（I、Ia、II、III）的 760 个氨基酸残基肽（计算分子量 78 k，pI 7.4；SDS-PAGE 分子量约 80 kD） 、IV、V、VI) 和 DNA 结合基序。在 CMV 启动子下整合到 XPD-SV40 细胞中的 XPD cDNA 质粒的转染子获得了接近正常的紫外线抗性。 XPD蛋白是ATP-和Mg 2+ 依赖性修复解旋酶，通过Western分析在具有TATA序列的dhfr片段的RNA合成起始复合物中检测到XPD蛋白。通过选择 XPD 蛋白 C 末端的 Arg722 至 Gly735 来创建兔抗 XPD 抗体。 Protein A 纯化的 IgG XPD 抗体可识别人类正常细胞和 HeLa 细胞的细胞提取物 (CE) 和核提取物 (NE) 中的 80kD XPD 蛋白。对 5 个日本 XPD 菌株核提取物的 10-20 μg 蛋白质进行 Western 分析，结果显示：（i）在 3 个菌株中检测到与 HeLa 浓度相同的 80 kD 片段； (ii)在一个菌株中检测到长85kD的1/3(可能存在剪接异常或插入突变)；(iii)在一个XPD细胞株中检测到NE所识别的蛋白质没有被检测到(无义突变)。 。

项目成果

Itoh, T., Fujiwara, Y., Ono, T., Yamaizumi, M.: "Uvs syndrome, a new general category of photosensitive disoder with defective DNA repair, is distinct from xeroderma pigmentosum variant and rodent group I." American Journal of Human Genetics. 56. 1267-127

Itoh, T.、Fujiwara, Y.、Ono, T.、Yamaizumi, M.：“Uvs 综合征是一种具有 DNA 修复缺陷的光敏障碍的新一般类别，与着色性干皮病变体和啮齿动物 I 组不同。”

藤原美定他: "XPD遺伝子に関し取りまとめ中につき該当なし。"

Yoshisada Fujiwara 等人：“不适用，因为我们目前正在编制有关 XPD 基因的信息。”