色素性乾皮症D群の変異とタンパク機能

着色性干皮病 D 组的突变和蛋白质功能

• 批准号: 06263211
• 负责人: 藤原 美定
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06263211/
• 关键词: 色素性乾皮症; 色素性乾皮症D群遺伝子; 色素性乾皮症D群蛋白質; 修復ヘリカーゼ; 色素性乾皮症D群抗体; 遺伝子変異; DNA修復

ヒトでは色素性乾皮症(XP)はUVによるピリミジン2量体(CPD)と(6-4)産物のヌクレオチド除去修復を欠損し,コケイン症候群(CS)は転写活性遺伝子のみのヌクレオチド除去修復を欠損する.われわれは最近XPD cDNAを発現クローニングした.XPD細胞はバルクDNA領域と転写活性遺伝子の両方の修復を欠損するので,本研究では(1)XPD蛋白の構造とヘリカーゼ機能及び修復・転写複合体への関与,(2)日本人XPD患者5名のノザン解析とXPD cDNAのRNA probeによるRNase protection assayによって変異を研究した.発現クローニングによって得たXPD cDNA(2372bp ORF)は760残基ペプチド(分子量87K,pI7.4)をコードし,DNA/RNA helicase motifs(I,Ia,II,III,IV,V,VI)とDNA結合domain(α-helix/turn/α-helix)をもった.GST-XPD融合蛋白や合成オリゴペプチドから〜90kDXPD蛋白を識別する抗体を得た.この抗体を用いたウエスタンブロット分析は,XPD蛋白はUV-DNAの修復複合体やTATA配列をもつdhfr/exon-1との転写複合体の中に存在し,ATP,Mg^<2+>依存性の修復・転写ヘリカーゼであることを強く示唆した.mRNAノザンブロットとRNase protection法は,XPD患者日本人3名と欧米人3名はXPDmRNAのサイズ(〜2.6kb)と発現量に大きい差はないので微小変異もち,日本人2名の患者には大きい異常がみられるので欠失変異をもつことを示唆した。

在人类中，心排骨色素（XP）缺乏紫外线诱导的核苷酸切除二聚体（CPD）和（6-4）产物的核苷酸切除修复，而可卡因综合征（CS）缺乏仅转录活性基因的核苷酸切除修复。我们最近表达了XPD cDNA。 XPD细胞缺乏体积DNA区域和转录活性基因的修复，因此，在这项研究中，我们研究了（1）XPD蛋白和解旋酶功能的结构以及参与修复/转录复合物的参与，（2）通过五个日本XPD患者和RNase Protection通过RNA探针进行XPD CDNA的北部分析研究了（2）突变。 XPD cDNA obtained by expression cloning (2372bp) ORF) encoded a 760-residue peptide (molecular weight 87K, pI7.4), and had DNA/RNA helicase motifs (I, Ia, II, III, IV, V, VI) and DNA-binding domain (α-helix/turn/α-helix).获得了将约90kDxPD蛋白与GST-XPD融合蛋白和合成寡肽区分开的抗体。使用该抗体的蛋白质印迹分析强烈表明，XPD蛋白在UV-DNA修复复合物和与TATA序列的DHFR/Exon-1中存在于TATA序列中，并且是ATP，Mg^<2+> - 依赖性修复和转录解动力酶。 mRNA Northern印迹和RNases保护方法表明，XPD mRNA和3名西方人的患者的大小（〜2.6kb）没有显着差异，因此XPD mRNA的大小（〜2.6kb）没有显着差异，而两个日本患者的大小（〜2.6kb）则遭受了较小的突变，表明他们的删除突变表现出了较大的表现出较大的表现出较大的表现。

项目成果

西尾永英,藤原美定: "コケイン症候群" Gerontology.7. 43-49 (1995)

Nagahide Nishio，Yoshisada Fujiwara：“科凯恩综合症”老年学.7 43-49（1995）。

Matumoto A,Fujiwara Y et al: "Photoactivated gilvocarcin V induces DNA-protein crosslinking in genes for human ribosomal RNA and dihydrofolate reductase." Photochemistry and Photobiology. 60. 225-230 (1994)

Matumoto A、Fujiwara Y 等人：“光激活的 gilvocacin V 诱导人核糖体 RNA 和二氢叶酸还原酶基因中的 DNA-蛋白质交联。”

Itoh T,Fujiwara Y et al: "UV-sensitive syndrome: Clinical and biochemical characteristics of a new DNA repair defective syndrome not belonging to any group of xeroderma pigmentosum and Cockayne syndrome." Human Genetics. (印刷中).

Itoh T、Fujiwara Y 等人：“紫外线敏感综合征：不属于任何着色性干皮病和科凯恩综合征的新 DNA 修复缺陷综合征的临床和生化特征”。