鳥類のZW型性決定機構のゲノム生物学的アプローチによる解析

使用基因组生物学方法分析鸟类 ZW 型性别决定机制

基本信息

批准号：
15011252
负责人：
水野重樹
金额：
$ 3.71万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

性決定および性分化初期過程に関与する可能性のある性染色体、特にW染色体上の遺伝子を網羅的に検索する目的で、ニワトリ2日胚(Hamburge-Hamilton stage 12〜13),3日胚(stage 19〜20),4日胚(stage 24〜25)の胚全体、5日胚(stage 27)の未分化生殖腺+中腎の一部からそれぞれ雌マイナス雄サブトラクションcDNAライブラリーを作製し、各ライブラリーから約5,000クローンずつ、合計21,120クローンをマクロアレイ化した。これらのマクロアレイをそれぞれ対応するステージの雌マイナス雄、雄マイナス雌サブトラクションcDNA,雌トータルcDNA,雄トータルcDNA, W染色体上の既知遺伝子PKCI-W cDNAをそれぞれプローブとして逐次ハイブリダイゼーションを行った結果、サブトラクションcDNAプローブで1127個、トータルcDNAプローブで104個の雌特異的発現の著しい、PKCI-W以外のcDNAクローンが選別された。サブトラクションcDNAプローブで多数のクローンが選別されたことは、これらのクローンがコピー数の少ないmRNAに由来することを示唆した。また、1127個のクローンの中、2日胚から170個が得られたことは、生殖腺分化(6日胚以降)に著しく先行して雌特異的な遺伝子発現が行われていることを示すもので、興味深く思われた。'そこで2日胚、3日胚、4日胚からサブトラクションcDNAプローブで選別され556クローン中532クローンをそれぞれアルカリホスファターゼ標識プローブとして、5種類の制限酵素でそれぞれ消化した雌雄のゲノムDNAに対するサザンブロットハイブリダイゼーションを行い、W染色体上の遺伝子由来と予想される67クローンを選別し、これらをハイブリダイゼーションのパターンから15タイプに分類した。各タイプに属する1クローンずつのcDNA塩基配列を決定したところ、W染色体上の遺伝子として既知のSPIN-Wに相当する3タイプ、ATP5A1Wに相当する1タイプの他、W染色体上の数種の未知の遺伝子由来のcDNAクローンが存在することが示唆され、塩基配列解析とW染色体上の局在部位の解析を進めている。

女性负面男性减法cDNA库是由鸡肉2天胚胎（汉堡 - 哈米尔顿阶段12-13），3天胚胎（阶段19-20），4天胚胎（24-25阶段）的整个胚胎创建的宏观阵列，每个库中约有5,000个克隆。这些宏观阵列使用女性负面男性，男性负面女性负雌性减法cDNA，女性总雌性cDNA，男性总cDNA，雄性总雌性cDNA和已知的基因PKCI-w cDNA在相应阶段进行，因此选择了具有明显女性特异性表达的PKCI-W以外的1127 cDNA克隆。选择用减去cDNA探针的众多克隆表明这些克隆源自低拷贝数mRNA。此外，在1127个克隆中，从2天的胚胎中获得了170个，表明女性特异性基因表达在性腺分化（从6天的胚胎）中显着先于很有趣。 '因此，使用从2天，3天和4天胚胎中选择的556个克隆中的532个克隆中的532个克隆和556个克隆中的532个探针，每个用碱性磷酸酶标签的探针消化，532个克隆的探针，预计将源自W染色体的基因和这些模式。当确定属于每种类型的每个克隆的cDNA碱基序列时，建议在W染色体上有三种类型的基因，与Spin-W相对应，这是Spin-W，一种与ATP5A1W相对应的类型，以及从W染色体上的几个未知基因和我们进行核层分析的cDNA克隆，并从W染色体上进行分析和分析。