ニワトリの左右卵巣の不斉分化現象の遺伝子レベルの解析

鸡左右卵巢不对称分化的基因水平分析

基本信息

批准号：
05277201
负责人：
水野重樹
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ニワトリ胚における左卵巣の分化と右卵巣の退化過程を遺伝子発現レベルで比較することを目的としているが、本年度はこのための遺伝子プローブの取得と解析を進めた。1)卵巣特異的に発現する2種の新規遺伝子の解析:孵化後1-3日のヒヨコの左卵巣cDNAライブラリーから、卵巣で高発現している17クローンを選別して部分的な塩基配列等を調べた。その結果、卵巣の形態形成に関係が深いと考えられる2種のcDNAクローン、pZOV3.pLOAO411に注目して解析を進めた。ZOV3遺伝子はサザンブロットならびに蛍光in situハイブリダイゼーションの結果からZ染色体短腕のほぼ中央部に局在することが示された。pZOV3は4425bpのインサーを含み、5'側に327アミノ酸残基をコードするORFが存在した。DNAデータベースを検索した結果、ZOV3は免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、2つのC2タイプIg-ループドメインを有することが分かったが、マウスのGP-70と33%、ニワトリのHT7と23%の相同性を示すのみで、卵巣特異的な発現ともあわせて新規遺伝子と考えられた。pLOAO411は常染色体の遺伝子で、約9.5kbの転写産物が卵巣でのみ検出された。現在、cDNA塩基配列決定を進めているが、決定された範囲では相同性のある遺伝子は見い出されなかった。多くのCys残基とN-結合型糖鎖付加部位を含むことからレセプター様の糖タンパク質をコードする遺伝子ではないかと推定している。2)性ステロイドホルモン合成酵素系遺伝子のcDNAクローニングと発現解析:コレステロールからエストラジオール-17βの生成に関与する5種の酵素の中、ニワトリでまだ得られていない3種の酵素のcDNAクローニングと培養細胞での発現確認を目指している。本年度は、3β-ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ/Δ5→4イソメラーゼのcDNAクローニング、塩基配列決定、cos7細胞での発現と3種の基質に対する酵素活性の確認を行なった。

目的是比较基因表达水平下鸡胚胎中左卵巢分化和右卵巢变性的过程，但是今年我们为此目的开始获取和分析基因探针。 1）对卵巢中特异性表达的两个新基因的分析：孵化后1-3天，从左卵巢cDNA库中，对卵巢中的17个高度表达的克隆进行了分类，并检查了部分核苷酸序列。结果，对两个cDNA克隆Pzov3.ploao411进行了分析，被认为与卵巢形态发生密切相关。 ZOV3基因被证明位于Southern印迹的Z染色体短臂的中央部分，并原位杂交结果。 PZOV3包含4425 bp插入物，5'侧有一个ORF编码327个氨基酸残基。搜索DNA数据库表明ZOV3属于免疫球蛋白超家族，并具有两个C2型IG-Loop域，但它仅显示与小鼠GP-70和Chicken HT7之间的33％和23％的同源性，并且被认为是一种新型基因，以及卵巢特异性表达。 PLOAO411是一种常染色体基因，仅在卵巢中检测到大约9.5 kb的转录本。当前，正在进行cDNA碱基测序，但在确定的范围内未发现同源基因。据估计，它是一个编码受体样糖蛋白的基因，因为它包含许多CYS残基和N连接的糖基化位点。 2）性类固醇激素合酶基因的cDNA克隆和表达分析：在胆固醇中涉及雌二醇-17β的五种酶中，我们的目标是cDNA克隆三种尚未在鸡中获得的酶的cDNA克隆，并在培养细胞中证实了该酶的表达。今年，进行了3β-羟基甾体脱氢酶/Δ5→4异构酶的cDNA克隆，进行了碱基测序，并确认了COS7细胞中的表达，并确认了三个底物的酶活性。