ニワトリの左右卵巣の不斉分化現象の遺伝子レベルの解析

鸡左右卵巢不对称分化的基因水平分析

基本信息

批准号：
05277201
负责人：
水野重樹
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ニワトリ胚における左卵巣の分化と右卵巣の退化過程を遺伝子発現レベルで比較することを目的としているが、本年度はこのための遺伝子プローブの取得と解析を進めた。1)卵巣特異的に発現する2種の新規遺伝子の解析:孵化後1-3日のヒヨコの左卵巣cDNAライブラリーから、卵巣で高発現している17クローンを選別して部分的な塩基配列等を調べた。その結果、卵巣の形態形成に関係が深いと考えられる2種のcDNAクローン、pZOV3.pLOAO411に注目して解析を進めた。ZOV3遺伝子はサザンブロットならびに蛍光in situハイブリダイゼーションの結果からZ染色体短腕のほぼ中央部に局在することが示された。pZOV3は4425bpのインサーを含み、5'側に327アミノ酸残基をコードするORFが存在した。DNAデータベースを検索した結果、ZOV3は免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、2つのC2タイプIg-ループドメインを有することが分かったが、マウスのGP-70と33%、ニワトリのHT7と23%の相同性を示すのみで、卵巣特異的な発現ともあわせて新規遺伝子と考えられた。pLOAO411は常染色体の遺伝子で、約9.5kbの転写産物が卵巣でのみ検出された。現在、cDNA塩基配列決定を進めているが、決定された範囲では相同性のある遺伝子は見い出されなかった。多くのCys残基とN-結合型糖鎖付加部位を含むことからレセプター様の糖タンパク質をコードする遺伝子ではないかと推定している。2)性ステロイドホルモン合成酵素系遺伝子のcDNAクローニングと発現解析:コレステロールからエストラジオール-17βの生成に関与する5種の酵素の中、ニワトリでまだ得られていない3種の酵素のcDNAクローニングと培養細胞での発現確認を目指している。本年度は、3β-ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ/Δ5→4イソメラーゼのcDNAクローニング、塩基配列決定、cos7細胞での発現と3種の基質に対する酵素活性の確認を行なった。

目的是在基因表达水平上比较鸡胚胎中左侧卵巢的分化和右侧卵巢的退化过程，今年我们为此目的进行了基因探针的获取和分析。 1）卵巢特异性表达的两个新基因分析：从孵化后1-3天的雏鸡左侧卵巢cDNA文库中筛选出17个在卵巢中高表达的克隆，并测定其部分碱基序列等。被调查。因此，我们将分析重点放在两个 cDNA 克隆 pZOV3.pLOAO411 上，这两个克隆被认为与卵巢形态发生密切相关。 Southern blot和荧光原位杂交结果表明，ZOV3基因几乎定位于Z染色体短臂的中央。 pZOV3含有4425bp的插入子，并且编码327个氨基酸残基的ORF存在于5'侧。检索DNA数据库发现，ZOV3属于免疫球蛋白超家族，具有两个C2型Ig环结构域，与小鼠GP-70同源性为33%，与鸡HT7同源性为23%，该基因被认为是一个新基因。由于其卵巢特异性表达。 pLOAO411 是常染色体基因，大约 9.5 kb 的转录本仅在卵巢中检测到。目前，cDNA测序正在进行中，但在确定的范围内尚未发现同源基因。由于它含有许多Cys残基和N联糖基化位点，因此推测它是编码受体样糖蛋白的基因。 2）性类固醇激素合酶基因的cDNA克隆和表达分析：涉及从胆固醇产生雌二醇-17β的五种酶中的三种的cDNA克隆和培养细胞，我们的目的是在鸡中尚未获得这些酶。中的表达式今年，我们克隆了3β-羟基类固醇脱氢酶/Δ5→4异构酶的cDNA，确定了其碱基序列，在cos7细胞中表达，并证实了其针对三种底物的酶活性。