カルシウムイオンによる平滑筋収縮の分子機構の解明

阐明钙离子诱导平滑肌收缩的分子机制

基本信息

批准号：
63641503
负责人：
多久和陽
金额：
$ 1.15万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63641503/
关键词：
平滑筋収縮カルシウムイオン Cキナーゼミオシン軽鎖キナーゼ

项目摘要

1.アゴニストによる平滑筋収縮におけるミオシン軽鎖(MLC)キナーゼ及びCキナーゼの役割を検討した。ウシ気管平滑筋をカルバコールで刺激し、同一試料の等尺性張力、20キロダルトン(20K)MLC、デスミンのリン酸化を測定し、これらのパラメーター間の関連を求めた。カルバコールは持続性の収縮をひきおこす。MLCキナーゼ活性の指標である20KMLCのリン酸化は刺激開始後速やかに増加し、1分後にピークに達した後減少するが、60分後において、なお刺激前値より高い値を持続する。Cキナーゼ活性の指標であるデスミンのリン酸化は刺激直後は変化を示さず、刺激開始60分後に、約10%の増加を示す。細胞外液カルシウムの除去により、アゴニストによる収縮は著しく抑制される。この条件下で、20KMLC及びデスミンのリン酸化はともに抑制される。また、種々のCキナーゼ阻害剤のフォルボールエスラルによる収縮に対する抑制効果を検討したが、十分な抑制作用を有する阻害剤をみいだせなかった。これら一連の実験のために入手可能であったウシ(成牛)気管平滑筋は、我々が以前用いていた仔牛気管平滑筋と比較してフォルボールエスラルに対する反応性が低く、Cキナーゼを介する平滑筋収縮機構の作動が微弱であると考えられた。次にアゴニストによるCキナーゼ活性化を反映するCキナーゼトランスロケーションの測定に関する基礎的検討を行なった。フォルボールエスラル刺激により、サイトソール分画のCキナーゼは60分後に約50%減少することをみいだした。今後、フォルボールエスラル反応性の高いブタ気管平滑筋及び頚動脈平滑筋を用いて以上の検討をさらに発展させる予定である。2.最近みいだされた血管内皮の産生する活性ペプチド、エンドセリンの作用機構を培養血管平滑筋を用いて検討した。その結果、エンドセリンはCa流入を促進するのみならず、G蛋白を介してphospholipaseCを活性化することをみいだした。

1. 我们研究了肌球蛋白轻链 (MLC) 激酶和 C 激酶在激动剂诱导的平滑肌收缩中的作用。用卡巴胆碱刺激牛气管平滑肌，并测量同一样品的等长张力、20 千道尔顿 (20K) MLC 和结蛋白磷酸化，以确定这些参数之间的关系。卡巴胆碱会引起持续的收缩。 MLC激酶活性指标20KMLC的磷酸化在刺激开始后迅速升高，1分钟后达到峰值，然后下降；但即使在60分钟后，该值仍高于刺激前的值。作为 C 激酶活性指标的结蛋白磷酸化在刺激后并未立即发生变化，但在刺激开始后 60 分钟增加了约 10%。细胞外液钙的去除显着抑制激动剂诱导的收缩。在此条件下，20KMLC 和结蛋白磷酸化均受到抑制。我们还研究了各种C激酶抑制剂对佛波醇诱导的收缩的抑制作用，但我们无法找到任何具有足够抑制作用的抑制剂。可用于这一系列实验的牛（成人）气管平滑肌对佛波醇的反应不如我们之前使用的小牛气管平滑肌，并且 C-激酶介导的平滑肌收缩机制的激活被认为是弱者。接下来，我们进行了一项关于测量 C-激酶易位的基础研究，这反映了激动剂对 C-激酶的激活。我们发现在佛波-esral 刺激 60 分钟后，胞质部分中的 C-激酶减少了约 50%。未来，我们计划利用具有高佛波烯醛反应性的猪气管平滑肌和颈动脉平滑肌进一步开展上述研究。 2. 利用培养的血管平滑肌研究了最近发现的由血管内皮产生的活性肽内皮素的作用机制。结果，我们发现内皮素不仅促进Ca内流，而且还通过G蛋白激活磷脂酶C。