カルシウムイオンによる平滑筋収縮の分子機構の解明

阐明钙离子诱导平滑肌收缩的分子机制

基本信息

批准号：
01641503
负责人：
多久和陽
金额：
$ 0.96万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)ブタ頸動脈脈平滑筋を用いて種々の収縮による20Kミリオシン軽鎖(MLC)リン酸化と張力の相関を検討した。ヒスタミンは細胞内Ca^<2+>濃度(〔Ca^<2+>〕i)の初期の一過程の上昇と,その後に引き続く基礎値よりわずかに高い持続的上昇の変化に一致して、1分後に頂値を示す20KMLCリン酸化をひきおこす。収縮60分後の時点において,なお基礎値より有意に高いリン酸化が観察される。高K^+刺激もヒスタミンと類似の20KMLCリン酸化の経時的変化を示し,収縮60分後の時点において有意なリン酸化が観察される。フォルポ-ルエステルは,ヒスタミン,高K^+刺激に比較してゆるやかな張力発生を示す。これに伴い20KMLCのリン酸化も除々に増大するが,発生する張力に比較してリン酸化の程度は小さい。X軸に60分後の20KMLCリン酸化を,y軸に60分後の張力をプロットすると,上記3種の収縮刺激のうち,ヒスタミンと高K^+刺激はほぼ同一のリン酸化・張力曲線を示す。一方,フォルボ-ルエステルによるものは明らかにこれとは異なる。サイクリックAMP(CAMP)を上昇させるフォルスコリンはこれら3種の刺激による収縮を抑制するが,これに伴ってヒスタミン及び高K^+刺激の場合には弛緩に伴いリン酸化の抑制がみられるのに対し,フォルボ-ルエステルによるリン酸化はごく軽度に抑制されるのみである。ピロリン酸ゲル電気泳動による解析(郡立臨床研大室博士との共同研究)ではフォルボ-ルエステル刺激では,ヒスタミン高K^+刺激とは移動度の異なるリン酸化ミオシンが観察された。動脈平滑筋は主としてCキナ-ゼのα型アイソザイムを有しフォルボ-ルエステル刺激によって細胞質中のCキナ-ゼは経時的,濃度依存的に減少した。(2)新しい生理活性ペプチドエンドセリン-1の作用機序を培養血管平滑筋細胞を用いて検討した。エンドセリンは特異的受容体に結合し,G蛋白質を介してフォスフォリパ-ゼCを活性化することが明らかとなった。

(1) 我们使用猪颈动脉平滑肌研究了 20K 多球菌素轻链 (MLC) 磷酸化与各种收缩期间张力之间的相关性。组胺的变化与细胞内 Ca^2+ 浓度 ([Ca^2+]i) 的初始一步增加一致，随后持续增加，略高于基础值，导致 20KMLC 磷酸化达到峰值。 1分钟后。收缩后60分钟，观察到磷酸化仍显着高于基础值。高K^+刺激还显示出与组胺相似的20KMLC磷酸化的时间过程，在收缩后60分钟观察到显着的磷酸化。与组胺和高 K^+ 刺激相比，福波尔酯表现出温和的张力产生。与此同时，20KMLC的磷酸化逐渐增加，但与产生的张力相比，磷酸化的程度很小。当在x轴上绘制60分钟后的20KMLC磷酸化和在y轴上绘制60分钟后的张力时，在上述三种类型的收缩刺激中，组胺和高K^+刺激产生几乎相同的磷酸化和张力曲线。另一方面，使用佛波酯的则与此明显不同。毛喉素可增加环磷酸腺苷 (CAMP)，抑制这三种刺激引起的收缩，但与此同时，在组胺和高 K^+ 刺激的情况下，磷酸化会随着松弛而受到抑制。佛波酯仅受到轻微抑制。焦磷酸凝胶电泳分析（与县临床研究所大室博士合作研究）表明，磷酸化肌球蛋白在佛波酯刺激下与在组胺高 K^+ 刺激下具有不同的迁移率。动脉平滑肌主要含有C-激酶的α型同工酶，在佛波酯刺激下，细胞质中的C-激酶随着时间的推移而减少，并且呈浓度依赖性。 (2)利用培养的血管平滑肌细胞研究新型生物活性肽endothelin-1的作用机制。研究表明，内皮素与特定受体结合并通过 G 蛋白激活磷脂酶 C。