ファゴサイトーシスにおける小胞体・ゴルジ体からのメンブレントラフィックの解明

阐明吞噬过程中内质网和高尔基体的膜运输

基本信息

批准号：
18050031
负责人：
初沢清隆
金额：
$ 3.39万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、ファゴサイトーシスにおいて、小胞体(ER)がphagosomeの形成初期に細胞膜と直接融合し膜成分をphagosome形成に供給することや、本来ERに局在するMHCクラスI分子群がphagosomeに送られ抗原提示に機能することがわかってきた。本研究は、「ER局在のSNAREタンパク質、syntaxin18(以下syx18)とSec22bが、ファゴサイトーシス時の膜融合反応に機能する」という最近の知見にも基づき、「ファゴサイトーシスにおけるER・ゴルジ体からのメンブレントラフィック機構」の総合的な解明を目的とする。本年度は以下の2点について成果を挙げている。(1)ファゴサイトーシスにおけるSec22bの機能解析・Sec22b過剰発現マクロファージ(J774/mVENUS-Sec22b)の解析を進めた結果、フォルボールエステル刺激による一過的な活性酸素の産生(oxidative burst)プロファイルが変化していた。産生に関与するNOX2複合体の発現量に変化が見られないことから、Sec22bがこれらの機能調節に関与することが考えられた。予備的実験から細胞膜局在のSNAREタンパク質もこの調節に関与することから、NOX2の機能発現には一連のメンブレントラフィックの存在が予想された。(2)LRG47のファゴサイトーシスにおける機能解析・p47 GTPaseファミリーのーつLRG47の過剰発現マクロファージ(J774/mVENUS-LRG47)を作製した。これまでの報告とは異なり、mVENUS-LRG47はERやゴルジ体には局在せず液胞様の構造体に存在し、NOX2複合体のgp91^<phox>やリン脂質PSのバイオセンサーLact-C2とよく共局在していた。この細胞では、NOX2の活性に変化は見られないが、Fc受容体依存のファゴサイトーシスが阻害されていたことから、この液胞様構造体の細胞膜へのトラフィッキングがファゴサイトーシスの効率制御に関与すると考えられた。

近年来，已经发现，在吞噬作用中，内质网（ER）直接与细胞膜融合，在形成吞噬体和供应的膜成分开始时，吞噬体的形成，最初是ersige the ersige to Phag的phageme to phagsos to phag ats to phagsos to phag as at phag as at phag as at phagsome caste to phagsome is to phagsomes carterment factions cast。根据最近的发现，“吞噬作用期间，膜融合反应中的ER定位的snare蛋白语法（以下简称Syx18）和Sec22b在膜融合反应中的功能”，该研究旨在全面阐明“吞噬作用中ER-GOLGI的膜交通机制”。今年，我们已经在以下两个点上取得了结果：（1）SEC22B在吞噬作用和SEC22B过表达巨噬细胞（J774/MVENUS-SEC22B）中对SEC22B的功能分析，表明phorbol酯会变化的瞬态氧化抗氧化刺激的瞬时氧化爆发曲线。由于参与生产的NOX2复合物的表达水平未观察到任何变化，因此认为SEC22B参与调节这些功能。初步实验还涉及该调节中的细胞膜定位弹蛋白，因此预测NOX2功能表达的一系列膜流量的存在。（2）制备了GTPase家族中LRG47的功能分析：p47过表达巨噬细胞（J774/MVENUS-LRG47）。与以前的报道不同，MVENUS-LRG47不定位于ER或高尔基体，而是存在于液泡样结构中，并且与NOX2复合物GP91^<phox>和磷脂ps的生物体Esensor Lact-C2均可很好地共定位。尽管该细胞中NOX2的活性没有变化，但FC受体依赖性吞噬作用受到抑制，人们认为将这种类似液泡的结构运输到细胞膜中会涉及吞噬吞噬作用的效率调节。