多様なトロゴサイトーシスモデルを用いた侵襲的相互作用による情報伝達機構の解明

使用各种吞噬作用模型阐明侵入性相互作用的信息传递机制

基本信息

批准号：
21KK0139
负责人：
津久井久美子
金额：
$ 12.15万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (B))
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-10-07 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

動物細胞トロゴサイトーシスモデル確立に向けて、バージニア大学にて動物細胞を用いた貪食アッセイ方法の研修を行った。CHO細胞の亜株であるLR73細胞を貪食細胞とし、アポトーシス細胞のFACSによる貪食アッセイ方法を学んだ。ここではUV照射によりアポトーシスを誘導したJurkat細胞をpH感受性の色素で染色し、酸性化貪食胞に由来するシグナルを検出した。技術の習得が完了した。また、LR73をエサとしてもわずかではあるがシグナルが観察されたことから、生細胞の取り込が起こる可能性が考えられた。赤痢アメーバにおけるトロゴサイトーシスの目的の一つが表面分子のCross-dressであるなら、その効率は病態が異なる臨床分離株で多様である可能性がある。これを評価するため、Cross-dress検出方法を検討した。赤痢アメーバ標準株(HM1:IMSS cl-6)とJurkat細胞を30分共培養した後、膜透過性処理をせず、抗MHC class I(MHCI)抗体、続いて二次抗体で処理し、FACSにて解析を行った。細胞サイズと複雑性のパラメータから赤痢アメーバの集団を規定し、この細胞集団をさらにFL1とFL4で展開した。FL1（緑）は自家蛍光を持つ赤痢アメーバのみ陽性となり、FL4（遠赤外）で抗MHCI抗体シグナルを評価した。この結果、FL1、FL4共に陽性の集団にFL4強陽性、弱陽性の二集団が観察された。FL4強陽性集団は取り込み途中で接着状態にあるJurkatからのシグナルが影響していると考えられ、FL4弱陽性の集団がCross-dress集団と考えられた。赤痢アメーバにおける既知のトロゴサイトーシス阻害剤であるガラクトースでCross-dressが低下したことから、この集団をCross-dress群として評価することとした。Cross-dress評価方法が確立された。

为了建立动物细胞trogositosus模型，我们在弗吉尼亚大学使用动物细胞进行了吞噬测定方法。 LR73细胞是CHO细胞的子份量，已成为吞噬细胞，并学会了如何使用凋亡细胞的FACS进行吞噬测定。在这里，用pH敏感的色素染色了通过紫外线辐照诱导凋亡的Jurkat细胞，并检测到源自酸化的kakyo细胞的信号。技能已经完成。此外，尽管LR73是一点食物，但仍观察到信号，因此可以认为可以掺入活细胞。如果红色 - 欧加巴变形虫中的肉毒细胞增多症的目标之一是表面分子的跨压力，则该效率在具有不同病理学不同的临床分离库存中可能是多种多样的。为了评估这一点，我们检查了一种跨海检测方法。在进行痢疾变形虫标准份（HM1：IMS CL-6）和Jurkat细胞30分钟后，请勿执行膜的渗透性，而是用抗MHC I类（MHCI）抗体进行处理，然后进行二级抗体。从细胞的大小和复杂参数中规定了一组痢疾变形虫，该细胞组进一步扩展在FL1和FL4中。 FL1（绿色）仅对具有自我荧光的痢疾变形虫，并评估了FL4中的抗MHCI抗体信号（FARRARED）。结果，在FL4的正组和迁移的阳性基团中都观察到了FL1和FL4。人们认为，FL4强的阳性群体受到了在中间粘附的Jurkat的信号的影响，而FL4迁移组被认为是交叉群体。该组被评估为跨海组，因为在红色diaphragm amoeba中的肉乳糖（Galactoose）中的横切下降，这是一种已知的静脉动物抑制剂。已经建立了交叉评估方法。