ソフトな分子間相互作用を認識できるペプチドプローブの開発と応用

识别软分子间相互作用的肽探针的开发及应用

基本信息

批准号：
16048202
负责人：
武田茂樹
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

膜上でのソフトな分子間相互作用はtwo-hybrid法や免疫沈降法などでは解析できないことが問題である。そこで本研究ではソフトな分子間相互作用を特異的に阻害できるペプチドプローブをファージディスプレイライブラリーから同定することを試みる。細胞膜に対しペプチドのファージディスプレイライブラリーを作用させて、特異的に少数のみのファージが結合する条件を実現する。そこにアゴニストなどの刺激を与えた場合に刺激を受けたタンパク質が構造変化し分子間相互作用を起こすことにより排除されたファージを得る。そしてそのファージから得られたペプチドがソフトな分子間相互作用を阻害あるいは探知できるプローブとして利用できるかどうか検証する。まずモデル実験としてはGタンパク質共役受容体と共役するGタンパク質のαサブユニットを人工的に融合させたものを発現させた細胞膜を用いた。酸添加条件で溶出したファージから8種類、アセチルコリン添加条件で溶出したファージから2種類のペプチド配列を得た。そのうち、酸添加条件で溶出したファージ1種類とアセチルコリン添加条件で溶出したファージ2種類は12残基中、同一の箇所で4残基が一致し、2残基は類縁のアミノ酸であった。そこでこれら3種のペプチド配列でもっとも相同性が高い部分の配列をもつ6量体ペプチドを化学合成しリガンド活性を示すかどうか調べた。するとこのペプチドは1μMのカルバコールの存在下でさらに受容体の活性化を20%程度促進するアロステリックリガンドとしての性質を示した

问题在于，无法使用两种杂交方法或免疫沉淀方法分析膜上的软子间相互作用。因此，在这项研究中，我们试图确定可以特异性抑制噬菌体显示库中软分子间相互作用的肽探针。在细胞膜上实现了肽库的噬菌体显示库，以达到只有少数噬菌体被特异性结合的条件。当刺激诸如激动剂之类的刺激时，刺激的蛋白质变化结构并引起分子间相互作用以获得已消除的噬菌体。然后验证是否可以将从噬菌体获得的肽用作可以抑制或检测软分子间相互作用的探针。首先，作为模型实验，使用了与G蛋白与G蛋白偶联受体的G蛋白α亚基的人为融合表示的细胞膜。在酸中添加条件下洗脱了八种类型的噬菌体，并从在乙酰胆碱添加条件下洗脱的噬菌体获得了两种类型的肽序列。其中，一种在酸性添加条件下洗脱的噬菌体和两种在乙酰胆碱添加条件下洗脱的噬菌体，四个残基在12个残基的同一位置重合，两个残基是相关的氨基酸。因此，将这三个肽序列的最同源序列的六聚体肽化学合成以确定它们是否表现出配体活性。因此，该肽表现出变构配体的特性，该配体在1μm卡巴醇存在下进一步促进受体激活约20％。

项目成果

期刊论文数量（14）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Mapping of Functional Sites on the Primary Structure of the Contractile Tail Sheath Protein of Becteriophage T4 by Mutation Analysis

通过突变分析定位噬菌体 T4 收缩尾鞘蛋白一级结构的功能位点

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Biochem.Biophys.Acta 1699
影响因子：
0
作者：
S.Takeda;M.Suzuki;T.;Yamada;N.Kageyama;F.Arisaka
通讯作者：
F.Arisaka

The receptor-Ga fusion protein as a tool for ligand screening : a model study using a nociceptin receptor-Gi2a fusion Protein

受体-Ga融合蛋白作为配体筛选的工具：使用伤害感受素受体-Gi2a融合蛋白的模型研究

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J.Biochem.(Tokyo) 135
影响因子：
0
作者：
S.Takeda;T.Okada;M.Okamura;T.Haga;J.Tanaka;N.Minamino
通讯作者：
N.Minamino

G蛋白質共役受容体機能の解析方法

G蛋白偶联受体功能分析方法

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
医学のあゆみ 212
影响因子：
0
作者：
小池太吾;武田茂樹
通讯作者：
武田茂樹

Stimulation of Intracellular Calcium Increases and Prostaglandin E2 Generation in Chinese Hamster Ovary Cells Expressing Receptor-Ga16 Fusion Proteins

表达受体 Ga16 融合蛋白的中国仓鼠卵巢细胞刺激细胞内钙增加和前列腺素 E2 生成

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J.Biochem.(Tokyo) 135
影响因子：
0
作者：
H.Suga;S.Takeda;T.Okada;M.Okamura;T.Haga
通讯作者：
T.Haga

Crystallization and preliminary X-ray analysis of gene product 44 from becteriophage Mu

噬菌体 Mu 基因产物 44 的结晶和初步 X 射线分析

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Acta Cryst. F16
影响因子：
0
作者：
Y.Kondou;D.Kitazawa;S.Takeda;E.Yamashita;M.Mizuguchi;K.Kawano;T.Tsukihara
通讯作者：
T.Tsukihara

DOI：
{{ item.doi }}
发表时间：
{{ item.publish_year }}
期刊：
{{ item.journal_name }}
影响因子：
{{ item.factor }}
作者：
{{ item.authors }}
通讯作者：
{{ item.author }}

数据更新时间：{{ journalArticles.updateTime }}

作者：
{{ item.author }}

数据更新时间：{{ monograph.updateTime }}

作者：
{{ item.author }}

数据更新时间：{{ sciAawards.updateTime }}

作者：
{{ item.author }}

数据更新时间：{{ conferencePapers.updateTime }}

作者：
{{ item.author }}

数据更新时间：{{ patent.updateTime }}

武田茂樹其他文献

Glyoxalase I 阻害化合物 sulfuretin の培養肺がん細胞への効果の検討

乙二醛酶 I 抑制剂硫黄素对培养肺癌细胞的影响研究

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
河村達郎;二村友史;SHANG Erchang ;室井誠;JANNING Petra ;上野雅佳;WILKE Julian ;武田茂樹;近藤恭光;ZIEGLER Slava ;渡辺信元;WALDMANN Herbert;長田裕之;椎名瞳，尾崎綾栞，多森翔馬，野崎優香，髙澤涼子，佐々木和教，石黒斉，宮城洋平，長嶋洋治，田沼靖一，大野茂男，秋本和憲;Yazaki Junshi;T. Endoh;矢崎潤史;栗田叡歩，蛭子真衣，中峰佳奈子，髙澤涼子
通讯作者：
栗田叡歩，蛭子真衣，中峰佳奈子，髙澤涼子

食品由来フラボノイドケルセチンのDNA二本鎖切断誘発作用の解析

食品黄酮槲皮素诱导DNA双链断裂的作用分析

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
染谷柚月;小林咲音;斎藤慎太;武田茂樹;足立典隆;黒沢綾.
通讯作者：
黒沢綾.

ステージ III-IV 乳癌における GLO 1 - PKCl 共発現患者は予後不良である Correlation between Glyoxalase 1 and PKCl is predictive of poor clinical outcomes in late-stage breast cancer

乙二醛酶 1 和 PKCl 之间的相关性可预测晚期乳腺癌的不良临床结果

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
河村達郎;二村友史;SHANG Erchang ;室井誠;JANNING Petra ;上野雅佳;WILKE Julian ;武田茂樹;近藤恭光;ZIEGLER Slava ;渡辺信元;WALDMANN Herbert;長田裕之;椎名瞳，尾崎綾栞，多森翔馬，野崎優香，髙澤涼子，佐々木和教，石黒斉，宮城洋平，長嶋洋治，田沼靖一，大野茂男，秋本和憲
通讯作者：
椎名瞳，尾崎綾栞，多森翔馬，野崎優香，髙澤涼子，佐々木和教，石黒斉，宮城洋平，長嶋洋治，田沼靖一，大野茂男，秋本和憲

統合表現型プロファイリングとケミカルプロテオミクスの手法による3量体Giタンパク質調節化合物の発見

使用综合表型分析和化学蛋白质组学方法发现三聚体 Gi 蛋白调节化合物

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
河村達郎;二村友史;SHANG Erchang ;室井誠;JANNING Petra ;上野雅佳;WILKE Julian ;武田茂樹;近藤恭光;ZIEGLER Slava ;渡辺信元;WALDMANN Herbert;長田裕之
通讯作者：
長田裕之