Gタンパク質共役受容体に働く新規治療薬シーズの探索と活性評価

寻找作用于G蛋白偶联受体的新治疗药物种子并评估其活性

• 批准号: 18032016
• 负责人: 武田 茂樹
• 金额: $ 3.97万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18032016/
• 关键词: 糸状菌; Gタンパク質共役受容体; インシュリン分泌; リガンドスクリーニング; ハイスループットスクリーニング; モルヒネ

Gタンパク質共役受容体(GPCR:G-protein coupled receptor)は、細胞膜表面上に存在する膜タンパク質で、細胞内に情報を伝える生体内センサーとして働いている。糸状菌は様々な二次代謝産物を産生する能力を持っており、新規リガンド探索に有用であると考えられる。にもかかわらず、糸状菌由来のGPCRリガンドの検索・開発はあまり行われていない。これはGPCRの活性測定が通常そのGPCRを発現させた生細胞を用いるため、多様な物質を含む糸状菌培養液をもちいても共雑物による非特異的な細胞の反応が多すぎて、正確で信頼性のある活性測定が行えないためである。本研究で用いた[35S]GTPγS結合活性測定はGPCR-Gα融合タンパク質ヘのアゴニスト依存的な[35S]GTPγS結合活性を測定し定量化することでリガンド活性を調べる方法である。この昆虫細胞で調製した融合タンパク質膜画分を用いた[35S]GTPγS結合活性測定は、糸状菌培養液中の共雑物の影響をあまり受けず、GPCRに作用するリガンドを特異的に検出することができるので、生細胞を用いた通常の活性測定法の欠点を克服した方法といえる。このため、混合物のスクリーニングには最適である。本研究ではこれまでに7つのGPCRに対して430種類の糸状菌培養液を用いて活性測定を行い、4つのGPCRに対して合計10個のアンタゴニスト、18個のアゴニスト活性を見出した。これらの結果は糸状菌培養液が新規GPCRリガンドの発見のためのよい材料であること、また我々のGPCR-Gα融合タンパク質を用いた[35S]GTPγS結合活性測定のスクリーニング系が高い効率をもつことをよく示している。また、このうちの1つの組み合わせについて動物実験を行い、ある糸状菌がすい臓に発現するGPR119を活性化することにより、インシュリンの分泌を促進して血糖値を下げる働きがあることがわかった。

G蛋白受体（GPCR：G蛋白偶联受体）是细胞膜表面上的膜蛋白，可作为将信息传播到细胞的体内传感器。硅胶具有产生各种二级代谢产物的能力，被认为可用于新的配体搜索。然而，源自丝绸形细菌的GPCR配体的搜索和发展并不多。这是因为GPCR的活性测量通常使用表达其GPCR的活细胞，因此，即使含有多种物质的YIL样细菌培养溶液，Co -Mittar的非特异性细胞反应也太高因为无法进行可靠的活动测量。本研究中使用的[35S]GTPγS结合活性测量是一种通过测量和量化GTPγS结合活性来检查配体活性的方法，GTPγS结合活性是一种依赖于激动剂的激动剂[35S]依赖性[35S]激动剂依赖性的激动剂。 [35S]使用在该昆虫细胞中制备的融合蛋白膜的GTPγS结合活性被特异性检测到作用于GPCR上的配体，因为它可以在丝绸样细菌培养中受到co -co-材料的影响。可以说，这是一种克服使用活细胞的正常活动测量方法的缺点的方法。因此，它是筛选混合物的理想选择。在这项研究中，使用430种针对7种GPCR的细菌培养溶液进行了活性测量，共有10位拮抗剂和18个激动剂用于4个GPCR。这些结果是，丝绸形细菌培养溶液是发现新的GPCR配体的良好材料，使用我们的GPCR-Gα融合蛋白，GTPγS结合活性测量的筛选系统非常有效。此外，对其中一种组合进行了动物实验，发现GPR119的激活（在胰腺中表达了某些丝绸形细菌）的活化具有促进胰岛素分泌和降低血糖水平。

项目成果

Gタンパク質共役受容体GPR61のN末端による恒常的活性化の検証

G蛋白偶联受体GPR61 N端组成型激活的验证

• 发表时间: 2007
• 作者: 豊岡勝;武田茂樹
• 通讯作者: 武田茂樹

Structural modeling and mutation analysis of a nociceptin receptor and its ligand complexes

伤害感受素受体及其配体复合物的结构建模和突变分析

• 期刊: J.Biochem. (In press)
• 作者: N. Akuzawa;S. Takeda;M. Ishiguro;N.Akuzawa et al.;N.Akuzawa et al.
• 通讯作者: N.Akuzawa et al.

5-oxo-ETE受容体を活性化するペプチドとその誘導体

激活5-oxo-ETE受体的肽及其衍生物

• 发表时间: 2008

Structural modeling and mutation analysis of a nociceptin receptor and its ligand complexes.

伤害感受素受体及其配体复合物的结构建模和突变分析。

• 发表时间: 2007
• 期刊: J. Biochem. (Tokyo) 141
• 作者: N. Akuzawa;S. Takeda;M. Ishiguro
• 通讯作者: M. Ishiguro

バクテリオファージMu基盤サブユニットgp45の精製と解析

噬菌体 Mu 亚基 gp45 的纯化和分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 鈴木栄貴;武田茂樹
• 通讯作者: 武田茂樹