マウス個体を用いたmab21遺伝子群の機能解析

使用小鼠个体进行 mab21 基因组的功能分析

基本信息

批准号：
16027214
负责人：
高橋直樹
金额：
$ 3.84万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16027214/
关键词：
発生分化動物遺伝子組織発現制御

项目摘要

mab21l1ノックアウトマウスの解析mab21l1ノックアウトホモ個体雄は野生型雌マウスとの間でも子供を作らない。ノックアウト雌もほぼ不妊であるが、きわめて低い頻度で野生型雄マウスとの間に子供を作ることが明らかになった。しかし、この子供は生後2日以内にすべて死亡していることから、母マウスの母性行動の異常が考えられる。不妊の原因は、試験管内授精の結果から、雄、雌共に生殖細胞の形成は正常であると考えられること、雄の包皮腺に形成異常があること、mab21l1遺伝子の発現が、鋤鼻器官、副嗅球、扁桃体、視床などの鋤鼻嗅覚神経系で観察されることなどから、性行動の異常によるものと考えて、上記の組織で特異的に発現している遺伝子群のノックアウトマウスでの発現解析を進めている。mab21遺伝子産物の機能解析mab21遺伝子産物にはこれまでに報告されているモチーフ等が全くなく、アミノ酸配列等からその生化学的機能を予測することはできない。そこで、mab21遺伝子産物の分子機能を明らかにするためにいくつかの実験をおこなった。mab21遺伝子産物に対する特異的抗体を用いた解析から、mab21蛋白は、マウス個体組織中で核に局在していることが明らかになった。また、mab21遺伝子の強制発現実験から、mab21蛋白は培養細胞内でも主として核に局在することが明らかになった。さらに、GSTタグを結合したmab21遺伝子産物を用いて精製した蛋白群を質量分析機を用いた解析を行った結果、mab21遺伝子産物と相互作用する蛋白として、importin, transportin, Sam68などの蛋白やRNAの細胞内輸送に関わるいくつかの蛋白や、Prl, LIM, Etsファミリーなどに属する多くの転写因子が同定された。これらの遺伝子産物との機能的相互作用を解析するため、培養細胞を用いた遺伝子導入実験をおこなったところ、mab21遺伝子産物は、遺伝子発現調節およびRNAの輸送に関わっていることが明らかになった。

mab21l1 敲除小鼠的分析。Mab21l1 敲除纯合雄性小鼠即使与野生型雌性小鼠也不会产生后代。尽管基因敲除的雌性小鼠也大多不育，但有研究表明，它们与野生型雄性小鼠产下后代的频率极低。然而，这些后代在出生后2天内全部死亡，表明母鼠有异常的母性行为。不孕的原因是，根据体外受精的结果，男性和女性的生殖细胞形成被认为是正常的，男性包皮腺存在畸形，以及mab21l1的表达基因与犁鼻器、副嗅球、平坦部有关由于这是在犁鼻嗅觉神经系统中观察到的，例如乳头和丘脑，因此我们认为这是由于性行为异常所致，并在敲除小鼠中对上述组织中特异表达的基因进行了表达分析。进步。 mab21基因产物的功能分析mab21基因产物目前还没有报道过的基序，并且不能从氨基酸序列预测其生化功能。因此，我们进行了多次实验来阐明mab21基因产物的分子功能。使用针对 mab21 基因产物的特异性抗体进行的分析表明，mab21 蛋白定位于个体小鼠组织的细胞核中。此外，mab21基因的强制表达实验表明，即使在培养细胞中，mab21蛋白也主要定位于细胞核中。此外，使用质谱仪对使用 GST 标记的 mab21 基因产物纯化的一组蛋白质进行分析，结果发现 importin、transportin、Sam68 和 RNA 等蛋白质与 mab21 基因产物相互作用。以及许多属于 Prl、LIM 和 Ets 家族的转录因子均已被鉴定。为了分析与这些基因产物的功能相互作用，我们利用培养细胞进行了基因转移实验，发现mab21基因产物参与基因表达调控和RNA转运。