FGF,FGF結合蛋白およびFGF受容体を標的とした扁平上皮癌の分子標的治療

针对FGF、FGF结合蛋白和FGF受体的鳞状细胞癌分子靶向治疗

基本信息

批准号：
14030057
负责人：
岡本哲治
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

研究目的:扁平上皮癌の増殖・浸潤・血管新生に重要な働きをしていると考えられるFGF, FGF結合蛋白HBp17およびFGF受容体の発現を蛋白および遺伝子レベルで検討すると共にFGFR遺伝子のチロシンキナーゼ領域の変異を検討し,血管新生,転移,予後との関連を明らかにする。さらに,これら遺伝子のアンチセンスDNAを扁平上皮癌細胞に導入し扁平上皮癌の分子標的診断・治療の可能性を探求する。結果:扁平上皮癌(SCC)の増殖・浸潤・血管新生に重要な働きをしていると考えられるFGF, FGF結合蛋白HBp17およびFGF受容体の発現を蛋白・遺伝子レベルで検討し,これら分子を標的とした扁平上皮癌の分子的診断・治療の可能性を探求した。71症例中44症例(62%)のSCCにFGFR3のG2128T変異を認め,同変異は697番目のコドンglycineのcystineへのアミノ酸置換を示唆した。変異症例では,FGFR3蛋白の細胞膜での過剰発現を認め,さらに,G2128T変異を有する遺伝子組み替えMT-FGFR3-TK蛋白ではTKリン酸化活性が上昇していることが明らかとなった。造腫瘍性を欠失しHBp17遺伝子を発現しないA431由来#4クローンにHBp17遺伝子を導入すると,in vitroおよびin vivoでの造腫瘍性を獲得した。一方,A431にHBb17/FOFBPのantisense遺伝子を導入すると,in vitroおよびin vivoでの増殖能は著明に低下した。さらに,アンチセンス導入細胞ではVEGF, FGF-2の発現が著しく低下していることが遺伝子および蛋白レベルで明らかとなった。これらの結果から,FGFsは扁平上皮癌の自己増殖促進因子・血管新生因子として機能していること,HBp17/FGFBPはFGFの活性化や扁平上皮の癌化と密接に関与していること,さらに扁平上皮癌においてFGFRのチロシンキナーゼ領域の変異を伴う機能異常が存在することが強く予想された。したがって,上記分子・遺伝子は扁平上皮癌の自己増殖能のみならず血管新生能にも密接に関係した分子標的と考えられた。

研究目的：检测在鳞状细胞癌的增殖、侵袭和血管生成中发挥重要作用的FGF、FGF结合蛋白HBp17和FGF受体在蛋白和基因水平上的表达以及我们将检查 FGFR 基因的酪氨酸激酶的区域变异并阐明它们与血管生成、转移和预后的关系。此外，我们还将把这些基因的反义DNA导入鳞状细胞癌细胞中，探索鳞状细胞癌分子靶向诊断和治疗的可能性。结果：我们在蛋白质和基因水平上检测了 FGF、FGF 结合蛋白 HBp17 和 FGF 受体的表达，这些物质被认为在鳞状细胞癌 (SCC) 的增殖、侵袭和血管生成中发挥重要作用。，并研究了这些分子的表达，探讨了鳞状细胞癌靶向分子诊断和治疗的可能性。在 71 例 SCC 病例中，有 44 例 (62%) 发现 FGFR3 中的 G2128T 突变，表明第 697 个密码子甘氨酸被氨基酸取代为胱氨酸。在突变情况下，FGFR3蛋白在细胞膜中过度表达，并且发现具有G2128T突变的重组MT-FGFR3-TK蛋白中TK磷酸化活性增加。当HBp17基因被引入A431衍生的克隆#4时，其缺乏致瘤性并且不表达HBp17基因，它在体外和体内获得了致瘤性。另一方面，当将HBb17/FOFBP反义基因引入A431时，其体外和体内增殖能力显着降低。此外，还发现反义转染细胞中VEGF和FGF-2的表达在基因和蛋白水平上显着降低。这些结果表明，FGF在鳞状细胞癌中充当自身生长促进因子和血管生成因子，HBp17/FGFBP与FGF激活和鳞状细胞癌密切相关，并且强烈预测与酪氨酸突变相关的功能异常FGFR 激酶区域存在于鳞状细胞癌中。因此，上述分子和基因被认为是不仅与鳞状细胞癌的自我增殖能力密切相关而且与血管生成能力密切相关的分子靶点。