免疫調節遺伝子とのフュージョンDNAワクチンによる細胞内寄生原虫感染制御の新戦略

使用具有免疫调节基因的融合DNA疫苗控制细胞内原虫感染的新策略

基本信息

批准号：
14021086
负责人：
姫野國祐
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は主としてトキソプラズマ強毒株(RH株)感染に対するフュージョンDNAワクチン法を確立した。1)まずトキソプラズマ抗原遺伝子であるSAG-1遺伝子とユビキチン遺伝子の融合を行った後にCOS-7細胞にそのフュージョンDNAを定常発現させ、抗SAG-1抗体で免疫沈降させた後に抗ユビキチン抗体を用いWestern blottingでSAG-1とユビキチンのフュージョン蛋白質が産生されることを確認した。2)ついで、ユビキチン遺伝子とSAG-1遺伝子を融合させることにより、SAG-1遺伝子産物がプロテアソームでprocessingを受けることを1)で用いたCOS-7細胞とプロテアソーム阻害剤であるMG-132を用いて間接的に証明した。3)本融合遺伝子でBALB/cマウスに2週間毎に4回、遺伝子銃を用いてDNAワクチンを行い、最終ワクチンの2週間後にトキソプラズマRH株を感染させた。その結果、SAG-1遺伝子によるDNAワクチンでは全く効果がなかったが、ユビキチン-SAG-1融合遺伝子によるDNAワクチンでは90%以上のマウスが生存し、強いワクチン効果が証明された。さらにユビキチン-SAG-1遺伝子ワクチン群ではSAG-1を標的とした強いCD8^+T細胞によるキラー活性が認められた。4)本法のごとくユビキチンプロテアソーム系の応用によるDNAワクチン法は細胞内寄生病原体に対する全く新規の、そして強力なDNAワクチン法であり、結核菌に対しても有効なワクチン法であることが示唆された。5)現在、結核菌に対するユビキチンプロテアソーム系の応用によるDNAワクチン法を抗原遺伝子として、Ag85B,MPB51遺伝子およびHSP65遺伝子とユビキチン遺伝子のフュージョン遺伝子の構築を完了している。

今年，我们建立了主要针对弓形虫（RH株）感染的融合DNA疫苗方法。 1）首先，我们将弓形虫抗原基因SAG-1基因与泛素基因融合，然后在COS-7细胞中不断表达融合DNA，用抗SAG-1抗体进行免疫沉淀，然后使用抗泛素抗体证实产生了SAG-1和泛素的融合蛋白。 2)接下来，通过融合泛素基因和SAG-1基因，我们证明了SAG-1基因产物使用1)中使用的COS-7细胞和蛋白酶体抑制剂MG-132进行蛋白酶体加工，这间接证明了这一点。。 3) BALB/c小鼠每两周用基因枪接种该融合基因四次，最后一次接种后两周，感染弓形虫RH株。结果，使用SAG-1基因的DNA疫苗根本没有效果，但使用泛素-SAG-1融合基因的DNA疫苗使90%以上的小鼠存活，显示出强大的疫苗功效。此外，在泛素-SAG-1基因疫苗组中，观察到针对SAG-1的CD8^+T细胞的强杀伤活性。 4)使用泛素蛋白酶体系统的DNA疫苗方法，例如该方法，是一种针对细胞内寄生病原体的全新且强大的DNA疫苗方法，并且已经表明它也是针对结核杆菌Ta的有效疫苗方法。 5）目前，我们以抗结核杆菌泛素蛋白酶体系统为抗原基因，采用DNA疫苗方法完成了Ag85B、MPB51基因、HSP65基因和泛素基因融合基因的构建。