真核細胞ゲノム上の複製ドメイン・レプリコンの複製機序の解明

阐明真核基因组复制域和复制子的复制机制

基本信息

  • 批准号:
    11239204
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 30.85万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1999 至 2003
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

(1)ヒトおよびマウスの培養細胞を用いて、細胞周期S期の進行に伴う複製の進行過程を、S期における複製タイミングと複製部位の核内配置、染色体バンド構造、さらに複製フォークの進行速度について解析し、これらが密接に関連することを明らかにした。特に、複製フォークの進行速度がS期の初期から中期にかけて一端減速し、後期に最も速くなることを、独自に開発したDNAファイバー上で複製フォークの進行速度を測定する方法により明らかにした。すなわち、染色体上でS期初期に複製するRバンド領域からS期後期に複製するGバンド領域の境界のR/G遷移領域、およびマウス細胞のセントロメアヘテロクロマチン周辺領域の複製フォークの進行速度か最も遅くなることを見出した。また、マウス・セントロメアヘテロクロマチン周辺領域の複製起点の活性化と複製フォークの進行速度はヒストンのアセチル化により制御されていることを明らかにした。さらに、カンプトテシン(CPT)処理によるDNA損傷時に作動するチェックポイント制御についても検討し、各種特異的阻害剤存在下での複製フォーク速度やDNA合成量を調べる実験から、DNA損傷時に、S期チェックポイント因子PI3KKが複製開始点の抑制と複製フォークの安定性に貢献することを見出した。(2)複製・転写等の核内イベントへの核マトリックスの関与を明らかにするため、転写誘導される熱ショックタンパク質HSP70遺伝子領域の核マトリックスとの結合状態について転写ファクトリーを含めたモデルを提示すると共に、転写されないゲノム領域が、複製前に核マトリックスに結合し、複製後に直ちに離れることを明らかにした。(3)分子コーミング技術を確立し、DNAファイバー上での複製解析へ応用する一方、インプリント遺伝子の複製がアリル間で非同調的なタイミングで複製することを独自の方法で証明した。
(1)利用培养的人和小鼠细胞,我们研究了细胞周期S期的复制时间、复制位点的核排列、染色体带结构和复制叉进展速度,并发现它们密切相关。有关的。特别是,我们使用独立开发的方法测量DNA纤维上的复制叉进展速度,发现复制叉进展的速度从S期早期到中期减慢,并在S期后期变得最快。换句话说,在染色体上早S期复制的R带区和晚S期复制的G带区之间的边界处的R/G过渡区中复制叉的进展速率,以及小鼠细胞中着丝粒异染色质周围的区域是最快的,我发现它已经晚了。我们还发现,小鼠着丝粒异染色质外围复制起点的激活和复制叉进展的速率受到组蛋白乙酰化的调节。此外,我们研究了当 DNA 因喜树碱 (CPT) 处理而受损时激活的检查点控制,并且通过研究在各种特定抑制剂存在下的复制叉速度和 DNA 合成量的实验,我们发现当 DNA 受损时, S期检查点控制我们发现PI3KK因子有助于抑制复制起点和稳定复制叉。 (2)为了阐明核基质在复制和转录等核事件中的参与,我们将提出一个模型,其中包括转录诱导的热休克蛋白HSP70基因区域与核基质的结合状态的转录工厂他们共同揭示了未转录的基因组区域在复制前与核基质结合,并在复制后立即离开。 (3)在建立分子梳理技术并将其应用于DNA纤维复制分析的同时,我们还证明了使用独特的方法使印记基因在等位基因之间以异步时间复制。

项目成果

期刊论文数量(60)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Masaki Ishida: "DNA Fluorescence In Situ Hybridization in Paramecium : Telomere Localization in Macronucleus"Zoological Science. 17巻. 1289-1295 (2000)
Masaki Ishida:“草履虫 DNA 荧光原位杂交:大核中的端粒定位”《动物学科学》,第 17 卷,1289-1295(2000 年)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
奥村 克純: "クロマチン構造とDNA複製"生体の科学. 54巻3号. 185-191 (2003)
Katsumi Okumura:“染色质结构和 DNA 复制”《生物科学》第 54 卷,第 3. 185-191 期(2003 年)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Teijiro Aso: "Structural Organization and Chromosome Location of the Mouse Elongin A Gene(Tceb3)"Cytogenetics Cell Genetics. 86巻3-4号. 259-262 (1999)
Teijiro Aso:“小鼠 Elongin A 基因 (Tceb3) 的结构组织和染色体位置”《细胞遗传学》第 86 卷,第 259-262 期(1999 年)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Naoyuki Fujita: "Methylation-mediated Transcriptional Silencing in Euchromatin by Methyl-CpG Binding Protein MBD1 Isoforms"Molecular and Cellular Biology. 19巻9号. 6415-6426 (1999)
Naoyuki Fujita:“甲基化介导的常染色质转录沉默”,《分子与细胞生物学》,第 19 卷,第 6415-6426 期(1999 年)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Tatsuya Hayashi: "Organization and Chromosomal Localization of the Human Endothelial Protein C Receptor Gene"Gene. 238巻2号. 367-373 (1999)
Tatsuya Hayashi:“人内皮蛋白 C 受体基因的组织和染色体定位”基因,第 238 卷,第 2 期,367-373 (1999)
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  • 发表时间:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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  • 通讯作者:
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  • 通讯作者:
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クロマチン構造とDNA複製
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  • 作者:
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  • 发表时间:
    2008
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    Yamagishi;K.;Sugiyama;M.;Kaneko;Y.;Nishizawa;M.;Harashima;S.;Yuko Katsuno;Kazuto Sugimura;Masaharu TAKEMURA;奥村 克純;下京未来;伊藤克;下京未来;伊藤克;伊藤克
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