新しいヒトABCファミリーcMOAT遺伝子は抗がん剤感受性を制御するか?

人类新的ABC家族cMOAT基因是否控制抗癌药物敏感性？

基本信息

批准号：
09255242
负责人：
和田守正
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

固形がんの化学療法におけるシスプラチンの貢献度は非常に大きいが、薬剤感受性の低下した腫瘍の出現が治療の足枷となっている。我々がシスプラチン耐性細胞株より単離したヒトcMOAT遺伝子について、抗がん剤の排出ポンプとして薬剤耐性に関与している可能性を検討して以下の成果を得た。1.頭頚部、前立腺、卵巣の各腫瘍由来のシスプラチン耐性細胞株で、我々が同定したヒトcMOAT遺伝子の転写が亢進していること、また、卵巣腫瘍由来のシスプラチン耐性細胞株では、蛋白レベルでも発現亢進していることを示した。2.シスプラチンやその他の抗がん剤耐性へのヒトcMOATの具体的関与を明らかにするために、cMOATを高発現しているHepG2細胞にcMOATのアンチセンス発現構築体をトランスフェクトし、コロニーフォーメーションアッセイ法により感受性変化を検討した結果、シスプラチン、CPT-11、ビンクリスチン等に対する感受性の増加を観察した。さらに、トランスフェクタントにおいて、ビンクリスチンとシスプラチンの蓄積が増加していることを観察した。3.クロスハイブリダイゼーション法によりcMOATに近縁の遺伝子を単離した。4.肝臓でビリルビンの排泄障害を持つ疾患であるDubin-Johnson症候群の患者4名で、cMOAT遺伝子の変異を同定した。いずれもN端側ATP結合領域の周辺に同定され、ファミリー間で良く保存されているこの領域が機能にも重要であることが確認された。今後、アンチセンスによる近縁の他の遺伝子発現を抑制している可能性を除くための、センスの構築体を用いたトランスフェクション実験、cMOATに近縁の遺伝子の耐性への関与の検討、およびDubin-Johnson症候群で同定された変異について、トランスフェクション実験による基質特異性の変化の解析が必須と考えられた。

尽管顺铂为实体瘤的化疗做出了重大贡献，但药物敏感性降低的肿瘤的出现是治疗的障碍。我们研究了从顺铂耐药细胞系中分离出的人cMOAT基因作为抗癌药物的外排泵参与耐药性的可能性，并获得了以下结果。 1.我们鉴定的人类cMOAT基因的转录在源自头颈、前列腺和卵巢肿瘤的顺铂耐药细胞系中增强。 2.为了阐明人cMOAT在顺铂和其他抗癌药物耐药性中的具体参与，我们用cMOAT反义表达构建体转染高表达cMOAT的HepG2细胞，并进行集落形成。使用测定方法检查灵敏度变化的结果，我们观察到对顺铂、CPT-11、长春新碱等的敏感性增加。此外，我们观察到转染子中长春新碱和顺铂的积累增加。 3.通过交叉杂交分离到与cMOAT密切相关的基因。 4. 在四名 Dubin-Johnson 综合征患者中发现了 cMOAT 基因突变，该综合征是一种肝脏胆红素排泄受损的疾病。所有这些都是在 N 端 ATP 结合区周围被鉴定的，证实了这个在家族中高度保守的区域对于功能也很重要。未来，我们将利用有义构建体进行转染实验，以消除反义抑制其他密切相关基因表达的可能性，检查与cMOAT密切相关的基因参与耐药性的情况，并针对Dubin-Johnson综合征中发现的突变，被认为对于通过转染实验分析底物特异性的变化至关重要。