色素性乾皮症A群マウスを用いたリポゾーム遺伝子治療の試み

使用着色性干皮病 A 组小鼠进行脂质体基因治疗试验

基本信息

批准号：
09255223
负责人：
錦織千佳子
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

色素性乾皮症(XP)は紫外線によってDNAに生じた傷を修復する酵素を欠損するために、日光露光部に皮膚癌を生じる高発癌性遺伝疾患である。XPは常染色体性劣性遺伝疾患であり、その遺伝子欠損を補う遺伝子治療を適用することが、根本治療法となる可能性が高い。XPA遺伝子をリポゾームを用いて導入することを最終目的として、それに必要な基礎実験としてピリミジンダイマーを特異的に修復する酵素であるT4EndonucleaseVを、HVJリポゾームに包埋したT4endoV-HVJリポゾームの有用性を調べた。ピリミジンタイマーに特異的なモノクローナル抗体(TDM2)並びに、(6-4)CT光産物に特異的なモノクローナル抗体(64M2)によって細胞核内のそれらのDNA傷害並びにその修復動態を検出した。XPA群細胞に紫外線(UVB200J/m^2またはUVC20J/m^2)照射直後にT4endoV-HVJリポゾームを1時間処理した群では、処理をしない群と比較してTDM2抗体に対する染色性が、明らかに減少し、64M2抗体に対する染色性に変化はなかったことから、T4endoV-HVJリポゾーム処理により細胞内にT4endonucleaseVがは入ることによってピリミジンダイマーのみが特異的に修復されたことが明らかになった。リポゾームの処理時間は、30分ではその効果は低く、1時間以上であれば十分の修復効果があった。HVJリポゾームの細胞傷害性は、1-2時間処理では問題なく、18時間処理では、細胞の形態はかなり乱れた。処理時間は1-2時間が適当と考えた。HVJリポゾームの有用性、最適な処理方法が碓立されたので今後はXPA蛋白をHVJリポゾームに包埋して、紫外線照射後のXPAマウス並びにXPAマウス表皮細胞を用いてその有用性を碓認したい。

着色性干皮病 (XP) 是一种高度致癌的遗传性疾病，由于修复紫外线造成的 DNA 损伤的酶缺乏，会导致暴露在阳光下的区域出现皮肤癌。 XP是一种常染色体隐性遗传病，应用基因疗法来补偿基因缺陷很可能是最终的治疗方法。以利用脂质体导入XPA基因为最终目标，作为必要的基础实验，我们研究了T4endoV-HVJ脂质体的实用性，其中T4EndonucleaseV（一种特异性修复嘧啶二聚体的酶）被嵌入到HVJ脂质体中。使用嘧啶计时器 (TDM2) 特异性单克隆抗体和 (6-4)CT 光产物 (64M2) 特异性单克隆抗体检测细胞核中的 DNA 损伤及其修复动态。在用紫外线(UVB200J/m^2或UVC20J/m^2)照射后立即用T4endoV-HVJ脂质体处理XPA组细胞1小时的组中，与未处理的相比，清楚地观察到TDM2抗体的染色减少，64。由于M2抗体的染色特性没有变化，因此可知，通过T4endoV-HVJ脂质体处理，T4核酸内切酶V进入细胞内，仅嘧啶二聚体被特异性修复。脂质体处理时间为30分钟，但效果较低，处理时间为1小时以上就有足够的修复效果。 HVJ脂质体的细胞毒性在处理1-2小时后并不显着，但在处理18小时后细胞形态明显受到干扰。我们认为处理时间1-2小时比较合适。现在我们已经确定了HVJ脂质体的有用性和最佳治疗方法，我们希望将XPA蛋白嵌入HVJ脂质体中，并使用XPA小鼠和紫外线照射后的XPA小鼠表皮细胞来确认其有用性。