B細胞リンパ腫に関与する遺伝子(BCL-6)の発癌への関与のメカニズムの研究

B细胞淋巴瘤相关基因（BCL-6）参与癌变机制的研究

基本信息

批准号：
07272214
负责人：
広沢信作
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07272214/
关键词：
BCL-6 プロモータールシフェラーゼリンパ腫

项目摘要

3番染色体上の遺伝子BCL-6は転写因子であるが、今回、BCL-6のプロモーター領域の解析、そして、BCL-6の結合するDNA塩基配列について検討した。BCL-6遺伝子の5'側上流、約3kbまでのフラグメントを用い、レポーターとしてはルシフェラーゼ遺伝子(LUC)を利用した。エレクトロポレーション法にて、バ-キット細胞株に導入して、48時間後に細胞を回収してLCU活性を測定した。pBCL-1318LucとpBCL-657Luc の2つのコンストラクトは高い活性を示した。一方、pBCL-989Lucの活性は比較的低かった。pBCL-133LucとpBCL-8Lcuとのプロモーター活性は非常に低値であった。-989から-658の領域には負に働くエレメントが存在し、-657から-134の領域がブロモーター活性に必要であることが判明した。この領域には、Sp1、GATA-1、AP-2などの反応エレメントが存在する。BCL-6蛋白の結合する塩基配列は、BCL-6のZnフィンガーとグルタチオンSトランスフェレース(glutathione S transferase,GST)との融合蛋白(B6ZF-GST)と、合成オリゴヌクレオチドを用いて検討した。オリゴヌクレオチドは中央に26bpの、ランダムな配列を有し、両端に18bpの既知の配列をもつ。B6ZF-GST蛋白に結合したオリゴヌクレオチドを両端の18bpをプライマーとしてポ-リメラーゼ反応(polymerase chain reaction,PCR)をかけて増幅した。同様のことを6回繰り返すし、増幅させたフラグメントをサブクローニングして、10個のクローンについて塩基配列を決定した。(T/A)NCTTTCNAGG(A/G)ATの14塩基に共通な塩基配列が認められた。これらのコンセンサス配列を有する遺伝子の発現を制御して、リンパ腫発症にも関与していると推測される。

第三铬材料上的遗传BCL-6是转录因子，但是这次我们检查了BCL-6的启动子面积的分析，以及结合BCl-6的DNA碱基序列。 BCl-6基因用于上游上游上游和约3KB的片段，并将荧光素酶基因（LUC）用作记者。在电穿孔方法中，将细胞引入BA-KIT细胞，并收集细胞48小时以测量LCU活性。 PBCL-1318-LUC和PBCL-657-LUC的两个构建体显示高活性。另一方面，PBCL-989-LUC的活性相对较低。 PBCL-133-LUC和PBCL-8LCU之间的启动子活性非常低。在-989至-658区域中有一个负面的元素，事实证明-657至-134对于braomoter活动是必需的。在该区域中，有反应元件，例如SP1，GATA-1和AP-2。使用融合蛋白（B6ZF-GST）和谷胱甘肽的转移酶（谷胱甘肽的转移酶，GST）和合成寡核苷酸检查Bcl-6蛋白的碱基序列。寡核苷酸在中心的26bp为26 bp，两端的已知阵列为18 bp。通过用聚合酶链反应（PCR）在两端施加18BP，可以扩增与B6ZF-GST蛋白结合的寡核苷酸。我重复了六次相同的东西，征服了放大的片段，并确定了10个克隆的基本序列。（t/a）在14个基本序列中发现了nctttcnagg（a/g）。假定具有这些共有序列的基因的表达受到控制并参与淋巴病。