血管内皮細胞におけるトロンボモジュリン遺伝子の発現制御の研究

血管内皮细胞血栓调节蛋白基因表达调控研究

基本信息

批准号：
06671077
负责人：
広沢信作
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

トロンボモジュリン(thrombomodulin,TM)遺伝子について、我々の研究の実験結果から、5′側上流域にプロモーター活性に重要な種々のエレメント(Sp1,CAATボックス)が存在して、実際に機能していることが明らかにした。今回、cAMP反応エレメント(cAMP responsive element,CRE)に対する3′非翻訳領域(3′UT)の役割を遺伝子レベルで検討した。CAT(chloramphenicol acetyltransferase)遺伝子をレポーターとして、TM遺伝子のプロモーターを含むコンストラクトpTM-374CATにTM遺伝子の3′UTを挿入した。トランスフェクションはヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVECs)にリポフェクチンによる方法で行った。CREを含むコンストラクトではcAMPの添加によりCAT活性の増加がみられ、CREを欠くコンストラクトでは反応はみられなかった。これらの結果から+2092にcAMP反応エレメントが存在し、cAMPの添加により転写の活性が増加することが確認された。また、ゲルシフトアッセイでは+2092を含む合成オリゴヌクレオチドを用いると、cAMPで処理した細胞から抽出した核蛋白が結合することが明らかになった。これらのことより3′非翻訳領域に存在するcAMP反応エレメントがTMの発現に重要であることが明らかになった。また、ポリA付加部位より下流の領域が負の転写活性を有することも明らかになった。

从我们对长血栓蛋白（TM）基因的研究的实验结果来看，有各种元素（SP1，CAAT框）对于5'侧的上层启动子活动很重要，我实际上揭示了它。这次，在遗传水平上检查了3'非翻译区域（3 UT）对cAMP响应元件（CRE）的作用。 CAT（氯霉素乙酰转移酶）基因是记者，将3的TM基因插入含有TM基因启动子的构建体PTM-374CAT中。转染是通过脂肪霉素向人脐带外阴内皮细胞（HUVEC）进行的。含有CARC的CRE增加了CAT活动，并且CRE没有任何反应，这缺乏CRE。从这些结果中，已经证实了cAMP反应元件在+2092中存在，而cAMP的增加增加了转移的活性。此外，据揭示了Gelsift分析使用的含有+2092的合成寡核苷酸将允许从营地处理的细胞中提取的核蛋白结合。很明显，在3'非翻译区域中的cAMP反应元件在TM的表达中很重要。还揭示了来自多个聚集的附加部分的下游区域具有负转录活性。