導入遺伝子に基づく個体発がんの研究

基于导入基因的个体致癌研究

基本信息

批准号：
06280224
负责人：
権藤洋一
金额：
$ 12.8万
依托单位：
Tokai University (1995)Kyushu University (1994)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、がん遺伝子、がん抑制遺伝子をジーンターゲティング法などを用いて、破壊、置換、導入を行なった。そのための方法の開発と、個体に及ぼす実際の影響を解析した。また、遺伝子の突然変異が発がんと関わっていることが、分子、細胞レベルから明らかなとなっているので、個体レベルでの検証も行なった。そのためのトランスジェニックマウスも開発した。H-ras遺伝子欠損マウスは正常のものと差がみられなかったので、N-ras遺伝子およびK-ras遺伝子欠損マウスを作成した。N-ras遺伝子欠損マウスはやはり生存し、正常のものとこれまでのところ違いが認められない。K-ras遺伝子欠損マウスは、すべて、胎生期もしくは出生後まもなく死亡し、生存に不可欠であることがわかった。H-ras遺伝子欠損の胎児繊維芽培養細胞を用いて、いろいろな成長因子の効果を検討したところ、正常の繊維芽細胞と違いがみられず正常なシグナルトランスダクションが行なわれていることが示された。すなわち、他の遺伝子がH-ras遺伝子の機能を補完していると思われる。(分担、中村)二段階相同組換え法の改良に成功し、マウスp53遺伝子を、ヒトのp53遺伝子や大きな欠失をもつp53遺伝子などにつぎつぎと置換することに成功し、目的としていた普遍的な遺伝子置換法をまずは確立できた。得られたES細胞からマウス個体を得て、また、交配もすることによって、p53遺伝子の生体内での機能を解明している。すでに得ていたp53遺伝子欠損マウスと、体細胞突然変異を検出するためのシャトルベクターをもつトランスジェニックマウスを交配した。その子孫を用いて、放射線照射の有無の影響も含め、突然変異の生じる頻度およびDNA変化の解析を始めた。(分担、権藤)

在这项研究中，使用基因靶向方法破坏，替换并引入了癌基因和肿瘤抑制基因。我们已经分析了实现这一目标的方法以及对个人的实际影响。此外，由于从分子和细胞水平可以清楚地看出，基因突变与致癌作用有关，因此我们还在单个水平进行了验证。为此，我们还开发了一种转基因鼠标。由于在正常生物的H-RAS基因缺陷小鼠中未见差异，因此创建了N-RAS和K-RAS基因缺陷型小鼠。缺乏N-RAS基因的小鼠仍然存活，到目前为止，正常的小鼠没有观察到差异。所有K-RAS基因缺陷型小鼠在胚胎中或出生后不久都死亡，被发现对于生存至关重要。使用培养的胎儿成纤维细胞缺乏H-RAS基因，我们研究了各种生长因子的作用，并表明进行正常的信号转导，而与正常成纤维细胞没有任何差异。也就是说，其他基因似乎补充了H-RAS基因的功能。（Nakamura共享）我们成功地改善了两阶段的同源重组方法，并用人p53基因和p53基因成功地取代了小鼠p53基因，并以较大的删除代替了p53基因，并能够首先建立我们旨在实现的通用基因替代方法。从获得的ES细胞中获得小鼠个体，并交配以阐明p53基因的体内功能。已经获得缺乏p53基因的小鼠与携带穿梭载体的转基因小鼠配对以检测体细胞突变。使用后代，我们开始分析突变和DNA变化的频率，包括存在或不存在辐射的影响。（贡多共享）