p53点突然変異マウス作成によるがん治療モデルの開発

通过创建p53点突变小鼠开发癌症治疗模型

• 批准号: 09255212
• 负责人: 中村 健司
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09255212/
• 关键词: p53; ES細胞; ジーンターゲッティング; 標的遺伝子置換; 点突然変異; マウス; 胸腺リンパ腫

p53遺伝子は、その変異がヒトの腫瘍から最も頻繁に検出されるがん抑制遺伝子の一つである。我々は、個体発がんにおけるp53遺伝子の突然変異と腫瘍の組織特異性とに注目し、p53欠損マウスを作成した。p53欠損マウスは、高頻度に胸腺にリンパ腫を発症し、生後6ヶ月以内に死亡する。また、ヒト腫瘍から頻繁に検出される変異は点突然変異が最も多い。すなわち、遺伝子機能の欠損だけでなく、特定の点突然変異が腫瘍の組織特異性を決めている可能性がある。そこで本研究では、これまでの研究成果をもとに、p53遺伝子を点突然変異に置き換えた突然変異マウスの作成を試みた。研究方法としては、ES細胞に2段階の遺伝子操作(標的遺伝子置換法)を施し、ヒト腫瘍で最も多く検出されるアミノ酸変異を伴うp53遺伝子の点突然変異(245番目のアミノ酸がアルギニンからトリプトファンに変異)と置き換えた。マウスp53遺伝子点突然変異導入ES細胞を用いてキメラマウスを作成し、さらに、ヘテロ型p53点突然変異マウスとホモ型p53点突然変異マウスを作成した。p53遺伝子をその点突然変異遺伝子と置き換えた場合、組織特異性および細胞の種類特異的にどのような腫瘍が発生するのかを解析し、p53遺伝子における特定の点突然変異と腫瘍発生の組織特異性との関係を追究した。その結果、ホモ型p53点突然変異マウスは、高頻度に胸腺リンパ腫を発症し、生後6ヶ月以内に死亡した。p53欠損マウスとp53点突然変異マウスで認められた自然発症腫瘍は、腫瘍の種類や発症時期に大きな違いが認められず、また平均寿命も類似していた。これらは、p53遺伝子の特定点突然変異が腫瘍の組織特異性を決めている可能性が少ないことを示唆している。今後、さらに発症する腫瘍を解析すると共に、正常p53遺伝子に対してドミナントネガティブ作用を示すかどうか追求する。

p53基因是癌症抑制基因之一，其突变在人类肿瘤中最常检测到。我们专注于单个癌变中肿瘤的p53基因和组织特异性的突变，并创建了p53缺陷小鼠。缺乏p53的小鼠经常在胸腺中出现淋巴瘤，并在生命后6个月内死亡。此外，在人类肿瘤中检测到的最常见的突变是点突变。也就是说，不仅可能存在基因功能的缺陷，而且特定点突变可能决定肿瘤的组织特异性。因此，在这项研究中，我们试图创建突变小鼠，其中基于先前的研究结果将p53基因替换为点突变。研究方法是在ES细胞上接受两步的遗传操纵（靶基因替代），并用p53基因的点突变（从精氨酸到色氨酸的位置245突变的氨基酸）取代，该突变涉及氨基酸突变，该氨基酸突变在人类肿瘤中最常见。使用小鼠p53基因点诱变ES细胞制备嵌合小鼠，此外，还制备了异型p53点突变小鼠和同型p53点突变体小鼠。当p53基因被点突变基因替换时，研究了基于组织特异性和细胞类型特异性的肿瘤将形成什么样的肿瘤，并研究了p53基因中的特定点突变与肿瘤发育的组织特异性之间的关系。结果，同型p53点突变小鼠在高频中发展出胸腺淋巴瘤，并在生命后6个月内死亡。在p53缺陷型小鼠和p53点突变小鼠中观察到的自发性肿瘤在肿瘤类型或发作的类型中没有显着差异，平均寿命相似。这些表明p53基因中的特定点突变不太可能确定肿瘤的组织特异性。将来，我们将分析更多的肿瘤，这些肿瘤将发展并研究它们是否会对正常p53基因表现出显着的负面影响。