微生物由来がん遺伝子機能抑制物質の研究

微生物来源的癌基因功能抑制剂的研究

基本信息

批准号：
03258241
负责人：
上原至雅
金额：
$ 5.76万
依托单位：
国立予防衛生研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至 1993
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ハ-ビハイシン(HMA)のSrcチロシンキナ-ゼ上の結合部位の同定及びヒト扁平上皮がん細胞に対する作用HMAが結合するp60^<vーsrc>上の部位の同定を試みた。 ^<35>SーMet(または-Cys)標識したp60^<vーsrc>の免疫複合体をHMA処理してSDSーPAGEで解析すると、p60^<vーsrc>の移動度が対照に比べ高分子側にシフトすることが認められた。S.aureus V8プロテア-ゼによる限定分解および臭化シアン分解により移動度が変化する断片を解析した結果から、HMAが結合する部位はキナ-ゼ領域を含むC末端領域であるらしいことが分かった。HMAはEGF受容体が過剰発現しているヒト扁平上皮癌A431細胞の形態をフラットに変化させEGFに対する増殖のレスポンスも変化させた。この時、EGF受容体の自己燐酸化レベルが低下したが、これはHMA処理によりEGF受容体の生合成が途上の160KDaまでしか進行せず、その後急速に分解することが原因であった。2.がん遺伝子機能抑制物質の探索と新しい活性評価法、探索法の開発癌遺伝子srcまたはras等を組み込んだマウスやラットの細胞(NIH3T3,NRK)を用い、形態変化の他、新たに確立した増殖因子要求性の獲得を指標に探索を行なった。約2000株の放線菌、糸状菌培養ろ液について調べたところ、src,Kーras細胞共に形態をフラットに変化させるものが1株、増殖因子要求性を高めるものが1株得られた。それぞれ、既知抗生物質radicicolとbafilomycinsであることが判明した。NIH3T3/vーsrc細胞の低張バッファ-破砕液の遠心上清にホルボ-ルエステル、Ca^<2+>、cAMPなどの活性化剤を加え、γー^<32>PーATPと反応させ、リン酸化された蛋白をSDSーPAGEで解析することにより、Aキナ-ゼ、Cキナ-ゼ及びチロシンキナ-ゼ活性を同時に検出する方法を開発した。キナ-ゼ型のがん遺伝子機能抑制物質の活性評価、探索への応用が考えられた。

1。鉴定HABIHAISIN（HMA）对SRC酪氨酸激酶的结合位点以及对人类鳞状细胞癌细胞的影响，我们试图鉴定HMA结合的p60^<VSRC>上的位点。当用HMA处理^<35> S-MET（OR-CYS）标记的P60^<V-SRC>免疫复合物并通过SDS-PAGE进行分析时，发现与对照组相比，P60^<V-SRC>的迁移率向对照组相比转移到了p60^<v-src>。分析由于金黄色葡萄球菌V8蛋白酶和氰基溴化降解而导致迁移率变化的碎片表明，HMA结合的位点是包含激酶区域的C末端区域。 HMA扁平改变了人类鳞状细胞癌A431细胞的形态，其中EGF受体过表达，并改变了对EGF增殖的反应。目前，EGF受体的自磷酸化水平降低了，这是由于以下事实：EGF受体的生物合成仅通过HMA治疗仅通过HMA治疗发展至160 kDa，然后迅速分解。 2。搜索癌基函数抑制器并开发新的方法来评估活动和搜索。除形态变化以及获得新确立的生长因子要求外，还使用了掺入Oncogenes SRC或RA的小鼠和大鼠（NIH3T3，NRK）的细胞。当研究了大约2,000株放线菌菌株和丝状真菌培养滤液时，一种改变了SRC和K-RAS细胞形态的菌株，一种菌株增加了生长因子的需求。发现它们分别为抗生素radiicicol和Bafilomycins。我们已经开发了一种通过添加诸如Holborester，Ca^<2+>之类的激活剂来检测Quinase，C Quinase和酪氨酸奎因酶活性的方法据认为，它可用于评估和搜索激酶型癌症基因功能抑制剂的活性。