微生物由来がん遺伝子機能抑制物質の研究

微生物来源的癌基因功能抑制剂的研究

基本信息

批准号：
03258241
负责人：
上原至雅
金额：
$ 5.76万
依托单位：
国立予防衛生研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至 1993
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ハ-ビハイシン(HMA)のSrcチロシンキナ-ゼ上の結合部位の同定及びヒト扁平上皮がん細胞に対する作用HMAが結合するp60^<vーsrc>上の部位の同定を試みた。 ^<35>SーMet(または-Cys)標識したp60^<vーsrc>の免疫複合体をHMA処理してSDSーPAGEで解析すると、p60^<vーsrc>の移動度が対照に比べ高分子側にシフトすることが認められた。S.aureus V8プロテア-ゼによる限定分解および臭化シアン分解により移動度が変化する断片を解析した結果から、HMAが結合する部位はキナ-ゼ領域を含むC末端領域であるらしいことが分かった。HMAはEGF受容体が過剰発現しているヒト扁平上皮癌A431細胞の形態をフラットに変化させEGFに対する増殖のレスポンスも変化させた。この時、EGF受容体の自己燐酸化レベルが低下したが、これはHMA処理によりEGF受容体の生合成が途上の160KDaまでしか進行せず、その後急速に分解することが原因であった。2.がん遺伝子機能抑制物質の探索と新しい活性評価法、探索法の開発癌遺伝子srcまたはras等を組み込んだマウスやラットの細胞(NIH3T3,NRK)を用い、形態変化の他、新たに確立した増殖因子要求性の獲得を指標に探索を行なった。約2000株の放線菌、糸状菌培養ろ液について調べたところ、src,Kーras細胞共に形態をフラットに変化させるものが1株、増殖因子要求性を高めるものが1株得られた。それぞれ、既知抗生物質radicicolとbafilomycinsであることが判明した。NIH3T3/vーsrc細胞の低張バッファ-破砕液の遠心上清にホルボ-ルエステル、Ca^<2+>、cAMPなどの活性化剤を加え、γー^<32>PーATPと反応させ、リン酸化された蛋白をSDSーPAGEで解析することにより、Aキナ-ゼ、Cキナ-ゼ及びチロシンキナ-ゼ活性を同時に検出する方法を開発した。キナ-ゼ型のがん遺伝子機能抑制物質の活性評価、探索への応用が考えられた。

1。我试图识别Habi Bihaisin（HMA）的Src酪蛋白Ze的结合位点，并识别HMA结合HMA的p60^<v-Src>上方的部分。 ^<35> S-MET（或-CYS）当通过HMA处理签名的P60^<V-SRC>的免疫复合物并用SDS-PAGE进行分析时，P60^<V-SRC>的传递受到控制相比之下，它被允许转移到聚合物侧。由于分析了由于氰化物分解而改变的片段，这些片段改变了由于氰化物分解而引起的运动程度基纳 - z HMA改变了EGF受体过度表达的A431细胞A431细胞的形式，并改变了增殖对EGF的反应。目前，EGF受体的自磷酸水平降低，这是由于HMA的生物合成仅在途中仅至160kDa，然后迅速分解。 2。癌症基因功能抑制物质和新的活性评估方法，发育癌基因SRC或RAS（NIH3T3，NRK）掺入了癌症基因SRC或RAS（NIH3T3，NRK），这是新建立的。扩散因素的要求，我们搜索为指数。在检查约2,000个接线细菌和约2,000个菌株的细菌培养溶液时，有一种菌株改变了SRC和K -RAS细胞中平坦的形式，一种菌株共享，增加了增殖因子的需求。事实证明，它们是辐射菌和巴菲霉素。 NIH3T3/V-SRC细胞低张紧缓冲液 - 将支撑液体的离心液添加到Holvo-Le-Surster，Ca^<2 +>，CAMP等，并对γ-^<32> P-反应通过使用SDS-PAGE分析磷酸盐氧化蛋白的ATP。 Kina-Zo型癌症基因功能抑制性物质的活性评估和探索被认为用于搜索。