プロテインキナ-ゼCによるプロテインホスファタ-ゼの燐酸化とその活性調節の研究

蛋白激酶C磷酸化蛋白磷酸酶及其活性调控的研究

基本信息

批准号：
01641526
负责人：
武田誠郎
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

イノシト-ル燐脂質の代謝回転を介するトランスメンブランコントロ-ルにおいてCa^<2+>-燐脂質依存性プロテインキナ-ゼ(Cキナ-ゼ)はその中心的役割を演じていると推定されるがその細胞内基質及びその機能は不明と言ってよい。一方、プロテインホスファタ-ゼは膜を介したシグナルトランスダクションにおいて情報伝達の停止に働くばかりでなく、インスリンの刺激伝達においては積極的に情報伝達にも関与する事実も知られており、重要な働きを演じていると推定される。今回我々はヒト赤血球のType 2A プロテインホスファタ-ゼ(分子量180,000,サブユニット構造α_1β_1δ_1)の種々プロテインキナ-ゼによる燐酸化を検索した。Ca^<2+>-カルモジュリン依存性プロテインキナ-ゼll、ホスホリラ-ゼキナ-ゼ、ミオシン軽鎖キナ-ゼ、カゼインキナ-ゼI、Gキナ-ゼはいずれのサブユニットも燐酸化せず、Aキナ-ゼとCキナ-ゼが調節サブユニットδ(74kDa)のみを定量的に燐酸化した。この燐酸化はホスファチジルセリン、ジオレインにより促進されるが、Ca^<2+>はむしろ抑制した。Aキナ-ゼ及びCキナ-ゼで燐酸化したδサブユニットのV8プロテア-ゼ、パパイン消化燐酸化ペプチドはSDSPAGEで同じ泳動像を示し、同一セリン残基の燐酸化が示唆された。この燐酸化で、Aキナ-ゼで燐酸化したH1ヒストンの脱燐酸化は1.5倍促進を受け、Type 2A プロテインホスファタ-ゼの活性調節にAキナ-ゼとCキナ-ゼの関与が示唆され、細胞内情報伝達における伝達終止の一機構と推測された。

假定Ca^<2+> - 磷脂依赖性蛋白激酶（C激酶）在跨膜控制中通过肌醇磷脂的转换起着核心作用，但其细胞内底物及其功能尚不清楚。另一方面，蛋白质磷酸酶不仅充当膜介导的信号转导期间的引起信号转导，而且还可以积极参与刺激胰岛素传播中的信号转导，并且被认为起着重要作用。在这里，我们通过各种蛋白激酶搜索了人类红细胞2a型磷酸酶（分子量180,000，亚基结构α_1β_1Δ1）的磷酸化。 Ca^<2+> - 钙调蛋白依赖性蛋白kinasell，磷酸氟西辛酶，肌球蛋白轻链喹啉酶，酪蛋白喹啉酶I和G QuiNase均未磷酸化任何亚基，而A和C Quiinase量化的磷酸化酶仅磷酸化仅磷酸化调节性亚基unitiitusunitiitusunitΔ（74 kda）。这种磷酸化是通过磷脂酰丝氨酸和二利蛋白促进的，但抑制了Ca^<2+>。用A和C- Quinase磷酸化的V8蛋白酶和木瓜蛋白酶消化的磷酸化δ亚基在SDSPAGE上显示出相同的苯酚成像，表明相同的丝氨酸残基的磷酸化。这种磷酸化促进了用喹啉酶1.5次磷酸化的H1组蛋白的去磷酸化，这表明Quinase和C Quinase在调节2A型蛋白磷酸酶的活性中参与，并推测这是细胞内信号传输的终止机制。