74kDaサブユニットを持つ新しいプロテインホスファタ-ゼの活性調節機構の研究

74kDa亚基新型蛋白磷酸酶活性调控机制研究

基本信息

批准号：
02680160
负责人：
碓井裕史
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ヒト赤血球サイトゾ-ル画分より精製したホスファタ-ゼIはタイプ2Aに属し,その分子量は180,000で、34kDaの触媒サブユニットαと63及び74kDaの調節サブユニットβ,δを各1分子ずつ含有している。cAMP依存性プロテインキナ-ゼ(Aキナ-ゼ)及びプロテインキナ-ゼC(Cキナ-ゼ)により、ホスファタ-ゼIの74kDa δサブユニットのセリン残基が定量的にリン酸化された。このリン酸化反応におけるホスファタ-ゼIに対するKmは、Aキナ-ゼで0.27μM、Cキナ-ゼで0.15μMで赤血球内の同酵素の推定濃度(0.2μM)にほぼ等しい。2.ホスホリラ-ゼキナ-ゼ,Ca^<2+>・カルモデュリン依存性プロテインキナ-ゼII,ミオシン軽鎖キナ-ゼ,cGMP依存性プロテインキナ-ゼ及びカゼインキナ-ゼIによるδサブユニットのリン酸化は認められなかった。3.リン酸化されたδサブユニットのトリプシン消化ペプチドの比較により、A及びCキナ-ゼに共通のリン酸化部位と、Cキナ-ゼに特有なリン酸化部位が認められた。4.Aキナ-ゼあるいはCキナ-ゼによるδサブユニットのリン酸化により、リン酸化H1ヒストンに対する脱リン酸活性は20ー40%上昇した。一方、リン酸化ミオシン軽鎖に対する脱リン酸活性は、Cキナ-ゼによるδサブユニットのリン酸化で50%促進されたが、Aキナ-ゼによるリン酸化では20%抑制された。異なるキナ-ゼによるδサブユニットのリン酸化が、異なる活性制御を行なうことが示唆された。

1.从人红细胞胞质级分中纯化的磷酸酶I，属于2A型，分子量为180,000，含有34 kDa的催化亚基α和63和74 kDa的调节亚基β和δ各一个分子。包含。磷酸酶 I 74kDa δ 亚基的丝氨酸残基被 cAMP 依赖性蛋白激酶（A-激酶）和蛋白激酶 C（C-激酶）定量磷酸化。在此磷酸化反应中，A-激酶的磷酸酶 I 的 Km 为 0.27 μM，C-激酶的 Km 为 0.15 μM，大约等于红细胞中相同酶的估计浓度 (0.2 μM)。 2.未识别出磷酸化酶激酶、Ca 2+ /钙调蛋白依赖性蛋白激酶II、肌球蛋白轻链激酶、cGMP依赖性蛋白激酶和酪蛋白激酶I对δ亚基的磷酸化。 3.比较磷酸化δ亚基的胰蛋白酶消化的肽，揭示了A和C激酶共有的磷酸化位点和C激酶特有的磷酸化位点。 4. A激酶或C激酶对δ亚基的磷酸化使磷酸化H1组蛋白的去磷酸化活性增加20-40%。另一方面，磷酸化肌球蛋白轻链的去磷酸化活性因C激酶磷酸化δ亚基而促进50%，但因A激酶磷酸化而抑制20%。有人认为，不同激酶对 δ 亚基的磷酸化对其活性的调节是不同的。