葉緑体RNAエディティング酵素の同定と作用部位認識機構

叶绿体RNA编辑酶的鉴定及作用位点识别机制

基本信息

批准号：
09278216
负责人：
廣瀬哲郎
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278216/
关键词：
RNAエディティング葉緑体 in vitro系翻訳分子生物学

项目摘要

今年度は葉緑体のRNAエディティングの分子機構と生物学的意義について明らかにするため以下の事柄について解析を行った。1.葉緑体in vitroエディティング系を構築するため、特異的なヌクレオチド残基に標識を施したmRNAを調製し新たな鋭敏で簡便な検出法を確立した。またこの検出法を用いて、葉緑体抽出液の調製法、反応条件などを試行しエディティング様活性をTLC上で検出することに成功した。2.エディティング反応に必要なシス配列に関する情報を得るために全配列と転写マップが明らかになっているタバコ葉緑体において全エディティング部位の同定を試み、計32箇所のエディティング部位を同定した。またそれぞれの部位周辺の配列比較、種間における保存性についても解析を行い、各エディティング部位の部位特異性、種特異性に関する知見を得た。3.葉緑体in vitro翻訳系を用いてRNAエディティングが翻訳に与える影響について解析を行い、ndhDmRNAのRNAエディティングが翻訳開始に必須であること、組織特異的にエディティング効率が変化することにより翻訳をコントロールしていることを明らかにした(EMBO Jounalに発表)。rpoA MRNAのエディティング部位がRNAポリメラーゼαサブユニットの制御領域に存在することを見出し、エティティングと葉緑体転写制御の関連についての可能性を見出した。

今年，我们分析了以下项目，以阐明叶绿体中RNA编辑的分子机制和生物学意义。 1.为了构建叶绿体体外编辑系统，我们制备了标记有特定核苷酸残基的mRNA，并建立了一种新的灵敏且简单的检测方法。此外，利用该检测方法，我们测试了叶绿体提取物的制备方法、反应条件等，并成功在TLC上检测到类编辑活性。 2.为了获得编辑反应所需的顺式序列信息，我们试图鉴定烟草叶绿体中的所有编辑位点，已经确定了完整的序列和转录图谱，总共鉴定了32个编辑位点。我们还分析了每个位点周围的序列比较和物种之间的保守性，并获得了有关每个编辑位点的位点特异性和物种特异性的知识。 3.使用叶绿体体外翻译系统，我们分析了RNA编辑对翻译的影响，发现ndhD mRNA的RNA编辑对于翻译启动至关重要，并且编辑效率会发生组织特异性变化（发表在EMBO杂志上）。我们发现rpoA mRNA的编辑位点存在于RNA聚合酶α亚基的控制区，并发现编辑与叶绿体转录调控之间可能存在联系。