Molecular mechanism of functional conversion from noncoding to coding RNAs

非编码RNA向编码RNA功能转换的分子机制

基本信息

批准号：
22K19293
负责人：
廣瀬哲郎
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19293/
关键词：
ノンコーディングRNA mRNA RNA顆粒翻訳リピート配列

项目摘要

HSATIII RNAは、その発見以来20年以上タンパク質をコードしないlncRNAとして非膜オルガネラの核内ストレス体の構造骨格としての機能が知られており、実施者のグループでは、これまでに核内ストレス体におけるHSATIIIによって係留される様々なタンパク質郡の機能解析を通して、HSATIIIがlncRNAとしてストレス応答性RNAスプライシング制御を行なっていることを明らかにしてきた。ところが最近、このHSATIIIがストレス回復後期になると細胞質に移行して別の非膜オルガネラを形成することを発見した。さらに驚くべきことに、細胞質に移行したHSATIIIは翻訳されて奇妙なリピートペプチドを合成している可能性が明らかになった。そこで今年度は、1. HSATIIIが翻訳されていること、2. 合成されたリピートペプチドが細胞内のどこに存在しているか、3. どのような因子と相互作用しているか、といったHSATIIIの翻訳に関する基盤情報を習得した。1ではHSATIIIリピートペプチドに対する抗体を作成して、このペプチドがストレス回復後期に特異的に合成され、このタイミングでの翻訳阻害剤処理によって合成が損なわれること、HSATIIIのKDでは合成が損なわれること、そしてポリソーム画分にHSATIII RNAが検出されることといった結果を得た。2では細胞分画によって、多くのHSATIIIペプチドは核内に局在していること、細胞質にも存在していることを明らかにした。さらに人工的にデザインしHSATIIIペプチドを細胞内で合成したところ、主に核内に局在することを確認した。3ではHSATIIIペプチドの免疫沈降と質量分析によって、相互作用因子として多くのRNA結合タンパク質を同定した。これらの基盤情報をもとに、今後HSATIIIの翻訳の意義を解明するための足がかかりができた。

自发现发现以来20多年，HSATIII RNA已被称为非膜器细胞器的核应激体的结构框架，作为无蛋白质的LNCRNA，从业人组先前已经揭示了HSATIII Contres sworconsige rna papsiment rna papsime rna plaincla splicing作为LNCRNA的LNCRNA，通过核定蛋白的核心分析，将其用于各种核素的核心分析。但是，最近，我们发现HSATIII迁移到细胞质中，并在应激恢复后期时形成另一个非膜细胞器。更令人惊讶的是，已经揭示出已迁移到细胞质的Hsatiii可以翻译成合成奇怪的重复肽的综合。因此，今年，我们获得了有关HSATIII翻译的基本信息，例如1。HSATIII翻译，2。合成重复的肽存在于细胞内，以及3。它们与之相互作用的因素。在1中，产生了针对HSATIII重复肽的抗体，并获得了结果，例如在应激恢复的后期特异性合成的肽，并通过在此时间安排的翻译抑制剂治疗中损害了合成，在HSATIIII和FRIES的kd中，合成受损。在2中，细胞分馏表明，许多HSATIII肽位于细胞核中，并且也存在于细胞质中。此外，当人工设计并在细胞内合成HSATIII肽时，可以证实它们主要定位于细胞核中。在3中，通过HSATIII肽的免疫沉淀和质谱法将许多RNA结合蛋白鉴定为相互作用因子。基于这些基本信息，我们能够在未来找到HSATIII翻译的重要性。