転写因子TFIIFの伸長因子としての機能解析

转录因子TFIIF作为延伸因子的功能分析

基本信息

批准号：
09277211
负责人：
北嶋繁孝
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09277211/
关键词：
TFIIF 転写伸長転写開始 p32 DNA依存性リン酸化酵素

项目摘要

1。TFIIFは、転写の開始/伸長因子である。この両反応過程でのIIF機能を知るためにRAP74サブユニットと相互作用しその機能を制御する蛋白質をスクリーニングした。酵母の2-ハイブリッド法によってRAP74の中央ドメインと特異的に結合する蛋白質p32を得た。p32は、核内にもわずか存在したがほとんどがミトコンドリアマトリックスに存在すること、p32のホモログは、ヒトのほかにマウス、線虫、酵母でも認められること、酵母p32ホモログ-p30と命名-のノックアウト株は、呼吸機能の障害がおこりp30がミトコンドリア機能に重要であることがわかった。p32はIIFのほかにも核内蛋白のIIB,ラミン、エイズウイルスの転写因子Tatとも相互作用するので核内転写を制御する可能性もある。事実、in vitroアッセイ系を用いて転写伸長活性への影響をテストしたところ、p32がIIF活性をTat共存下で促進させる結果を得た。今後、この解析とともにRAP74の他のドメインと結合するクローンのスクリーニングを続ける。また、RAP74のC-末欠失タンパクを強制発現させ、in vivoでの転写活性を見るために、発現プラスミドを作製した。疾患におけるIIF機能の関わりを知る一端として自己免疫疾患患者の血清を調べることでSLEをはじめとする患者にRAP74に対する自己抗体が存在することを見い出した。2。核に存在する細胞障害チェック機構であるDNA依存性リン酸化酵素が、TBP,IIBをリン酸化することがわかった。IIFのリン酸化は明らかではなかった。TBP,IIBのリン酸化による転写基本活性調節を明らかにした。

1。TFIIF是转录启动/伸长因子。为了在这两种反应过程中找出IIF函数，筛选了与Rap74亚基相互作用并调节其功能的蛋白质。通过酵母2杂交法获得了特异性结合Rap74中心结构域的蛋白p32。尽管核中也存在p32，但发现大多数p32同源物在小鼠，线虫和酵母菌以及人类中都发现，并且酵母p32同源物的敲除菌株（称为p30）命名为p30-命名为p30-引起了呼吸功能障碍，并且P30对线粒体式功能很重要。除IIF外，p32还与核蛋白IIB，层lamin和AIDS病毒转录因子TAT相互作用，因此它也可能调节核转录。实际上，使用体外测定系统测试对转录伸长活性的影响表明，p32在TAT存在下促进了IIF活性。将来，我们将继续筛选与Rap74其他域结合的克隆以及此分析。此外，准备表达质粒以有力表达Rap74的C末端缺失蛋白，并在体内观察转录活性。通过检查自身免疫性疾病的患者的血清作为IIF功能参与疾病的一部分，我们发现包括SLE在内的患者中存在自身抗体对RAP74。 2。发现DNA依赖性磷酸烯酶，一种细胞核中存在的细胞毒性检查机制，磷酸化的TBP和IIB。 IIF的磷酸化尚不清楚。揭示了通过TBP和IIB的磷酸化来调节转录基础活性。