転写因子の欠損に起因する発がんにおける基本転写因子の役割と核内シグナル伝達機構

基础转录因子及核信号转导机制在转录因子缺陷癌变中的作用

基本信息

批准号：
15024240
负责人：
大熊芳明
金额：
$ 4.1万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ヒトTFIIEαのZnフィンガーの機能解析この領域の4個のシステインをアラニンに置換したC129A、C132A、C154A、C157Aと、グルタミン酸E140、アスパラギン酸D164をアラニン、リジンに置換したE140A、E140K、D164A、D164Kの点変異に関して、転写と他の基本転写因子との結合に関して解析した。その結果、ZnフィンガーのN末側は転写開始と伸長への移行の2段階に関わり、C末側は転写開始に機能する結果が得られた。他因子との相互作用を調べると、N末2変異はTFIIFβとの結合が強くなり、一方C末の2変異は、TFIIHのXPBサブユニットとの結合が減弱していたが、これらは転写結果を良く説明する。一方、酸性アミノ酸の点変異に関しては、転写がむしろ促進していた。特にD164Aは、転写活性が大きく増加してした。これら酸性領域には未知因子が機能している可能性が示唆され、今後これを検索していく。2.分裂酵母TFIIEとRNAポリメラーゼII(PolII)の相互作用の解析分裂酵母TFIIEの2サブユニットとPolIIサブユニットとの結合を調べたところ、TFIIEαはRpb5、βはRpb2とRpb12に強く結合した。PolIIは転写開始の際にその構造を変化させるが、その際に構造を変えるのは主にRpb5とRpb2である。これらに各々αとβサブユニットが結合することを我々が明らかにしたことで、転写の際にPolII活性中心近傍にTFIIEが結合するという事実と合わせ、この構造変化をTFIIE、特にそのαサブユニットが制御している可能性が考えられるに至った。3.メディエーター複合体の解析核内シグナル伝達に関わるメディエーターのサブユニットにタグを付け発現させるヒトHeLa細胞株を我々で確立し、これからメディエーターを精製したところ、3つのサブタイプからなることが分った。

1。对人类TFIIEα的锌指的功能分析，我们分析了C129A，C132A，C154A和C157A点突变的转录和其他基础转录因子的结合，其中该区域的四个半胱氨酸在该区域的四个半胱氨酸被丙氨酸和E140A，E140A，E140K，D164A和D164A替换D164天冬氨酸被丙氨酸和赖氨酸取代。结果，Zn手指的N末端侧有两个步骤：转录启动和向伸长的过渡，而C末端则起作用用于转录启动。当研究与其他因素的相互作用时，N末端2突变显示与TFIIFβ的结合更强，而c末端2突变减弱了与TFIIH的XPB亚基的结合，这很好地解释了转录结果。另一方面，对于酸性氨基酸的点突变而言，转录得到了促进。特别是，D164a的转录活性显着增加。有人提出，未知因素可能在这些酸性区域起作用，我们将来会搜索它。 2。研究裂变酵母TFIIE与RNA聚合酶II（polii）之间的相互作用分析时，研究了两个裂变酵母Tfiie和polii亚基之间的结合时，TFIIEα强烈结合至RPB5和β与RPB2和RPB2和RPB12结合。 polii在开始转录后改变了其结构，但目前主要是RPB5和RPB2改变了结构。通过揭示α和β亚基与每种结合，以及TFIIE在转录过程中与polii活性中心附近结合的事实，TFIIE可能会受到TFIIE的调节，尤其是其α亚基，尤其是其α亚基。 3。对介体络合物的分析，我们建立了一个人类的HeLa细胞系，该系列用核信号传导的介体的亚基标记并表达了介体的亚基，并从中纯化了介体，并发现它们由三个亚型组成。