基本転写因子TFIIEとTFIIHによる核内シグナル伝達と転写のカップリング機構

基本转录因子TFIIE和TFIIH核信号转导与转录的偶联机制

基本信息

批准号：
13014212
负责人：
大熊芳明
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13014212/
关键词：
基本転写因子 TFIIE TFIIH RNAポリメラーゼII CTD リン酸化ヌクレオチド除去修復 XPC

项目摘要

1.ヒトTFIIEαのZnフィンガー領域の構造解析ヒトTFIIEは、αとβの2サブユニットがα2β2の4量体を形成し、転写開始と伸長への移行に機能する。αは中央のコア領域にznフィンガーモチーフを有しており、この欠失変異体は試験管内転写系においてドミナントネガティブとして機能することから、転写において重要な機能を担っていると考えられる。さらに原核生物である古細菌類にも最近、ヒトTFIIEαのZnフィンガー領域を含むN末端領域だけがホモログとして存在することが示され、その種を越えた機能の重要性が考えられている。そこで我々は、この領域をNMRにより構造解析した。その結果、亜鉛依存に構造を形づくる、Znフィンガーモチーフであることが実証された。その機能について、現在解析中である。2.RNAポリメラーゼII(Pol II)の転写開始から伸長への移行段階の解析昨年度、線虫TFIIEβホモログを用いて、Pol II最大サブユニットC末端の7アミノ酸繰り返しCTD配列の2番目と5番目のセリンのTFIIHによるリン酸化のうち、5番目のセリンリン酸化が転写伸長への移行活性と密接な関連性があることを示してきた。そこで、今年度はさらにβサブユニットのC末端にTFIIEのこの転写伸長への移行活性に関与する領域があることを見い出した。この領域内のアミノ酸残基を点突然変異により置換してやると移行活性のみならず、Pol IIのリン酸化活性も大きく低下することを明らかにした。3.ヌクレオチド除去修復因子XPCの修復反応におけるTFIIHとの相互作用XPCは紫外線等によるDNAの損傷修復反応において損傷部位を認識して修復反応の引き金を引く因子であることを我々は明らかにしているが、今回このXPCがそのC末端でTFIIHと結合することが修復活性においても大変重要であることを示した。

1。人TFIIEα人TFIIE的Zn手指区域的结构分析导致α和β的两个亚基形成α2β2的四聚体，该四聚体在转录和向伸长的过渡中起作用。 α在中心核区域具有锌指基序，该缺失突变体在体外转录系统中起主要负面的作用，被认为是转录中的重要功能。此外，最近已经表明，只有N末端区域，包括人类TFIIEα的锌指区域，作为原核生物中的同源物存在，并且人们认为功能以外的功能的重要性。因此，我们通过NMR分析了该区域。结果，证明它是锌指基序，以锌依赖性方式塑造结构。此功能目前正在分析中。 2。分析从去年从转录开始到RNA聚合酶II（POLII）的伸长的过渡阶段，我们使用了线虫TFIIEβ同源物来表明，在7氨基酸重复界限的第二和第五丝氨酸的磷酸化中，在第二和第五丝氨酸的磷酸化中转录伸长的活性。因此，今年我们进一步发现，在β亚基的C端有一个区域，该区域参与TFIIE转录伸长的过渡活性。已经发现，用点突变代替该区域内的氨基酸残基不仅会显着降低转移活性，而且还会显着降低POL II的磷酸化活性。 3. XPC修复反应中的核苷酸切除修复因子与TFIIH相互作用，我们揭示了XPC是一个因紫外线射线等引起的DNA损伤修复反应的损伤部位的因素，现在我们已经证明，对于XPC与Tfiih结合的c-termentihus，它非常重要。