ヌクレオチド除去修復のバックアップ機構に関する研究

核苷酸切除修复备份机制的研究

基本信息

批准号：
14658159
负责人：
松永司
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、紫外線誘発DNA損傷であるシクロブタン型ピリミジン二量体や(6-4)光産物を特異的に認識するモノクローナル抗体を作製し、1J/m^2という正常ヒト細胞の生存率に影響を与えない紫外線線量域におけるDNA損傷修復能を測定できる超高感度定量系を開発した。その結果、従来の線量域(10-40J/m^2)では全く修復能が見られなかった色素性乾皮症A群(XP-A)患者由来細胞XP12BE、およびXP-G患者由来細胞XP2BIにおいて、(6-4)光産物が24時間で約40-50%修復されるという現象を見出した。本研究では、この現象がヌクレオチド除去修復が完全に破壊されたときのバックアップシステムによるものか否かさらに検証した。そこで、臨床症状と修復欠損がより重篤なXPEMB-1(XP-A)細胞、およびXPCS2LV(コケイン症候群併発型XP-G)細胞について1J/m^2照射後の(6-4)光産物の修復動態を解析したところ、これらの細胞ではウェスタンブロッティングで各欠損タンパク質が全く検出できなかったが、やはり24時問で20-40%程度の修復が観察された。また、検出限界以下の変異型タンパク質の存在とそれによる残存活性を否定するため、XPAあるいはXPGのノックアウトマウス由来細胞の供与を受けて同様の解析を行った結果、色素性乾皮症患者由来細胞で見られるよりも程度は低いものの(6-4)光産物の修復傾向が確認された。以上の結果より、1J/m^2照射時に見られるヌクレオチド除去修復欠損細胞における(6-4)光産物の修復能は、ヌクレオチド除去修復以外のバックアップシステムによる可能性が示唆された。

我们产生了单克隆抗体，这些抗体特异性地识别环丁烷类嘧啶二聚体，它们是UV诱导的DNA损伤，以及（6-4）光产物，并开发了一种超高敏感的定量测定系统，该测定系统可以在Ultraviolet DOSE DOSE DOSE范围内无法影响人类的生存率，从而测量了紫外线DOSE DES损伤能力的DNA损伤能力。结果，我们发现，在24小时内，在24小时内，在24小时内，（XP-A）患者的细胞XP12BE和XP2BI患者的细胞在24小时内修复了（6-4）光产物，并从Xeroderma copmentota A（XP-A）患者（XP-A）患者（XP2BI）细胞中没有维修能力，该患者均无修复能力。这项研究进一步研究了这种现象是否是由核苷酸切除修复完全破坏时备用系统引起的。因此，我们分析了XPEMB-1（XP-A）细胞中1J/M^2的（6-4）光产物的修复动力学，具有更严重的临床症状和修复缺乏，以及XPCS2LV（可可蛋白的综合征综合症状XP-GEN），尽管western clot conters inters clotting a in n n in in n n n n n n n n n n in n in n insy中均不足。此外，为了否认在检测极限以下的突变蛋白的存在及其残留活性，对源自XPA或XPG的基因敲除小鼠的捐赠进行了类似的分析，尽管在较低程度上，确认了修复（6-4）光propoductucts的趋势。以上结果表明，在1J/m^2辐射期间看到的核苷酸切除修复缺陷细胞中（6-4）光产物的可修复性可能是由于备用系统以外的备用系统造成的。