ヌクレオチド除去修復反応の細胞内調節機構に関する研究

核苷酸切除修复反应的细胞内调控机制研究

基本信息

批准号：
12143202
负责人：
松永司
金额：
$ 20.22万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12143202/
关键词：
DNA損傷ヌクレオチド除去修復 DDB シクロブタン型ピリミジンダイマー紫外線ユビキチン・プロテアソーム系アポトーシス c-Jun 試験管内修復反応 XPA H2AX (6-4)光産物局所紫外線照射ゲルシフトアッセイ

项目摘要

我々はこれまでDDB (DDB1/DDB2ヘテロダイマー)がヌクレオチド除去修復の促進因子として働くことを示してきたが、最近このDDBがユビキチン・プロテアソーム系にも関与することが示されており、本研究でもヌクレオチド修復の調節や修復以外におけるDDBの機能に視野を広げて解析を行った。具体的には、作製したDDB1特異的モノクローナル抗体を用いてDDB1の細胞内局在性を調べるとともに、DDB1とDDB2を各々ドキシサイクリン存在下で過剰発現する細胞株を樹立し、各サブユニットを過剰発現させたときの細胞への影響を検討した。その結果、抗DDB1モノクローナル抗体による免疫染色像は、主に細胞質に局在するという従来の過剰発現細胞を用いた報告とは異なり、核内でドット状の局在を示した。また、この染色像はDDB2遺伝子に変異をもつXP-E細胞、およびDDB2の発現が抑制されているチャイニーズハムスター細胞でも観察されることからDDB2に非依存的であることがわかり、他の因子の関与が考えられた。また、核の一部に局所紫外線照射を行うとこのドットはDNA損傷部位に集積し、この反応はDDB2に依存していた。一方、DDB1を過剰発現させた細胞ではドット状の染色像は見られず、多くは細胞質のみが強く均質に染色された。興味深いことに、このDDB1過剰発現細胞株は増殖能やコロニー形成能に著しい抑制が見られ、一部の細胞ではアポトーシス誘導が観察された。さらに、ヌクレオチド除去修復能には顕著な影響は認められなかったが、過剰発現時に細胞内のc-Jun量が顕著に増加し、またリン酸化体も増加していることがわかった。以上の結果より、DDB1がc-Junの活性調節およびアポトーシスにも関与する可能性が示唆された。

我们已经表明，DDB（DDB1/DDB2异二聚体）一直是去除核苷酸的促进因子，但最近该DDB也参与了泛素原生系统，并且该研究也已扩展到该功能。 DDB的of除了调节和修复核苷酸恢复。具体而言，使用创建的DDB1特异性单克隆抗体检查DDB1的细胞内局部区域，并且DDB1和DDB2的设置是用细胞量建立的，这些细胞量过高地表达了多克西克林，并且过度表达每个亚基。我们检查了对细胞的影响。结果，抗-DDB1单克隆抗体的免疫呈阳性图像是一种局部局部局部，与传统上偏置细胞的报道不同，主要位于细胞质中。另外，DDB2观察到这种染色图像，因为它在中国仓鼠细胞中观察到，这些仓鼠在具有DDB2基因的XP-E细胞表达中被抑制。当在核的一部分上进行局部紫外线照射时，将点积聚在DNA损伤位点上，该反应取决于DDB2。另一方面，在未发现过度表达的DDB1的细胞中，未发现点形染色图像，并且许多细胞质被强烈染色。有趣的是，DDB1过度电流细胞在增殖和菌落中显着，并且观察到一些细胞的细胞凋亡。此外，尽管对去除核苷酸的去除没有显着影响，但是在过表达期间，细胞中的C-JUN量大大增加，并且磷酸化也增加了。上述结果表明，DDB1可能参与C-JUN的活性和凋亡。