人工染色体を利用した新規マラリアワクチンの開発

利用人工染色体开发新型疟疾疫苗

基本信息

批准号：
19659105
负责人：
油田正夫
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659105/
关键词：
マラリア人工染色体スポロゾイト生ワクチンワクチン

项目摘要

マラリアは最も重要な感染症の1つである。肝臓感染ステージでは以前よりガンマ線で弱毒化したスポロゾイトにより強力な感染阻止免疫が誘導できることが知られていた。また最近では遺伝子操作した弱毒化スポロゾイトによる免疫誘導が報告されている。しかしながらスポロゾイトの生ワクチンとして利用には、蚊から得られる原虫数の少なさを考慮すると、多くの困難が伴うことが予想される。一方このステージでのコンポーネントワクチン作製の試みは、特定の原虫タンパク質に限られており、その可能性が十分に引き出されているとは言い難い。本研究ではマラリア人工染色体を利用することによって、スポロゾイトと肝臓内ステージの複数の抗原タンパク質を弱毒化した赤血球感染ステージの原虫に発現させ、感染阻止免疫を誘導することを試みた。肝臓感染ステージの遺伝子CS protein, pbs36を、HSP70遺伝子上流領域を発現プロモーターとして組み込んだ人工染色体ベクター(pH70CEN)にサブクローニングした。この人工染色体ベクターは大腸菌とのシャトルベクターであり,大腸菌でプラスミドとしてクローン化した後、エレクトロポーレーションで原虫のシゾントに導入した。人工染色体が導入された原虫は人工染色体上のhuman DHFR遺伝子により抗マラリア薬に耐性を獲得した。また人工染色体を持つ原虫は、当該遺伝子を赤血球感染ステージで発現していた。現在人工染色体を導入した原虫をマウスに感染させ、感染阻止免疫の誘導を評価している。

疟疾是最重要的传染病之一。人们早就知道，在肝脏感染阶段，经伽马射线减毒的子孢子可以诱导强大的感染阻断免疫力。此外，最近还报道了使用基因工程减毒子孢子进行免疫诱导。然而，考虑到从蚊子中获得的原生动物数量较少，预计使用子孢子作为活疫苗会遇到很多困难。另一方面，现阶段制造成分疫苗的尝试仅限于特定的原生动物蛋白，很难说它们的潜力已得到充分利用。在这项研究中，我们试图通过使用疟疾人工染色体来表达减毒红细胞感染阶段寄生虫的子孢子和肝内阶段的多种抗原蛋白，从而诱导感染阻断免疫。将肝脏感染阶段基因CS蛋白pbs36亚克隆到人工染色体载体(pH70CEN)中，该载体包含HSP70基因的上游区域作为表达启动子。该人工染色体载体是与大肠杆菌的穿梭载体，在大肠杆菌中克隆为质粒后，通过电穿孔导入原生动物裂殖体中。引入人工染色体的寄生虫由于人工染色体上的人类DHFR基因而获得了抗疟药物抗性。此外，具有人工染色体的原生动物在红细胞感染阶段表达该基因。我们目前正在用含有人工染色体的原生动物感染小鼠，并评估诱导感染阻断免疫力。