マラリア原虫昆虫内ステージの完全培養系の確立

疟疾寄生虫虫内阶段完整培养体系的建立

• 批准号: 21659105
• 负责人: 油田 正夫
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659105/
• 关键词: マラリア; スポロゾイト; 培養; ワクチン

スポロゾイトはオオシストから放出された直後は肝臓への感染性をほとんど持っていない。蚊の唾液腺に感染することによって初めて感染性を獲得する。感染性の増加は実に1000倍に達すると言われており、したがってこの過程をin vitroで再現することが実用的な培養系確立のための最も重要な課題である。マラリア原虫の遺伝子はスポロゾイト期を通じて、AP2-Spという転写因子によって誘導される。しかしながらAP2-Spにより制御される遺伝子の中でも唾液腺感染に関連する遺伝子(MAEBLなど)と肝臓感染に関連する遺伝子(SPECT2など)では発現プロファイルは大きく異なる。前者のグループは唾液腺感染前に発現のピークを持ち、後者は唾液腺感染後にピークを持つ。したがってそれらの遺伝子の発現調節にはAP2-Spと協調して働きその作用を調節する別の転写因子(調節因子、co-regulaor)が関与していると考えられる。我々はこの転写調節因子の候補として新たなAP2 familyの転写因子を見出しAP2-Sp2と命名した。本転写因子はオオシスト期のスポロゾイトで発現され、その遺伝子を破壊した原虫ではスポロゾイトが形成されなかった。DNAマイクロアレイで解析したところ唾液腺感染関与する遺伝子の発現は低下していたが、肝臓感染に関与する遺伝子の発現はほとんど低下していなかった。また人工染色体を用い主要な遺伝子のプロモーター活性に与えるノックアウトの影響を調べたところ、マイクロアレイのデータを支持する結果が得られた。今後この転写因子AP2-Sp2を手掛かりとしてスポロゾイトの遺伝子発現調節機構を解明し、肝臓感染能を持ったスポロゾイトの培養系の確立につなげたい。

从卵囊中释放出来后，子孢子对肝脏几乎没有感染性。它首先通过感染蚊子的唾液腺获得传染性。据说传染性增加了1000倍之多，因此在体外重现这一过程是建立实用培养系统的最重要挑战。疟原虫基因在整个子孢子阶段由称为 AP2-Sp 的转录因子诱导。然而，在AP2-Sp调控的基因中，唾液腺感染相关基因（如MAEBL）和肝脏感染相关基因（如SPECT2）的表达谱存在显着差异。前一组在唾液腺感染前表达高峰，后一组在唾液腺感染后表达高峰。因此，认为与AP2-Sp协同调节其作用的另一种转录因子（共调节因子）参与调节这些基因的表达。我们发现了一个新的 AP2 家族转录因子作为该转录调节因子的候选因子，并将其命名为 AP2-Sp2。该转录因子在卵囊阶段的子孢子中表达，并且在该基因被破坏的寄生虫中不形成子孢子。 DNA微阵列分析表明，与唾液腺感染相关的基因表达下降，但与肝脏感染相关的基因表达几乎没有下降。此外，当我们使用人工染色体研究敲除对主要基因启动子活性的影响时，我们获得了支持微阵列数据的结果。未来，我们希望以AP2-Sp2这个转录因子为线索，阐明子孢子的基因表达调控机制，从而建立具有感染肝脏能力的子孢子培养体系。

项目成果

LISP1 is important for the egress of Plasmodium berghei parasites from liver cells

• DOI: 10.1111/j.1462-5822.2009.01333.x
• 发表时间: 2009-09-01
• 期刊: CELLULAR MICROBIOLOGY
• 影响因子: 3.4
• 作者: Ishino, Tomoko;Boisson, Bertrand;Baldacci, Patricia
• 通讯作者: Baldacci, Patricia

Functional Identification of the Plasmodium Centromere and Generation of a Plasmodium Artificial Chromosome

• DOI: 10.1016/j.chom.2010.02.010
• 发表时间: 2010-03-18
• 期刊: CELL HOST & MICROBE
• 影响因子: 30.3
• 作者: Iwanaga, Shiroh;Khan, Shahid M.;Waters, Andrew P.
• 通讯作者: Waters, Andrew P.

Transcription factor AP2-Sp and its target genes in malarial sporozoites

• DOI: 10.1111/j.1365-2958.2009.07005.x
• 发表时间: 2010-02-01
• 期刊: MOLECULAR MICROBIOLOGY
• 影响因子: 3.6
• 作者: Yuda, Masao;Iwanaga, Shiroh;Kaneko, Izumi
• 通讯作者: Kaneko, Izumi

Functional Identification of the Plasnodium Centromere and Generation of a Plasmodium Artificial Chromosome

疟原虫着丝粒的功能鉴定和疟原虫人工染色体的产生

• 发表时间: 2010
• 期刊: Cell, Host & Microbe. 7(掲載確定)
• 作者: Iwanaga S;Khan SM;Kaneko I;Christodoulou Z;Newbold C;Yuda M;Janse CJ;Waters AP
• 通讯作者: Waters AP