マラリア肝内型原虫の感染維持機構の解明

阐明肝内疟原虫的感染维持机制

基本信息

批准号：
15019043
负责人：
油田正夫
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019043/
关键词：
マラリアスポロゾイト EST 翻訳制御遺伝子ノックアウト

项目摘要

本研究ではマラリア原虫の肝細胞内寄生の分子的基盤を明らかにすることを目的とし、原虫遺伝子の発現解析、およびそれらの遺伝子の逆遺伝学的手法を用いた機能解析をおこなった。今年度以下の成果を上げた。1.中腸スポロゾイトおよび唾液腺スポロゾイトのESTの大量解析をおこなった。解析したEST数はそれぞれ1-2万である。解析データは今後、一般に公開する予定である。このことを視野に入れて、現在データベース化の作業をおこなっている。2.肝細胞感染ステージの原虫精製法を確立し、このステージのEST解析をおこなった。現在肝細胞感染30時間後の原虫の解析をおこなっている。今後さらに感染後の時間の異なる肝内型原虫を精製し、ESTの解析をおこなう。時間軸での遺伝子発現の変化を解析しその機能を知る手がかりとするとともに、肝臓感染維持機構の全体像を明らかにしたい。3.スポロゾイトEST解析データをもとに肝臓感染後にはじめて翻訳される2種類の遺伝子を同定した。免疫電顕法により感染細胞内での局在を調べたところ両者とも、原虫が感染肝細胞内に形成する寄生胞に局在することが明らかになった。これらの遺伝子をノックアウトし、原虫の肝臓への感染性を解析したとろ、約1万分の1まで感染性が低下した。従ってこれらの遺伝子が肝細胞内での感染維持に重要であることが分かった。現在、同様の手法を用い肝細胞感染に関わる新たな遺伝子を探索中である。4.上に述べた遺伝子の制御に関与する翻訳制御エレメント配列はmRNAの非翻訳領域に存在している可能性が高い。翻訳制御機構を解明する目的で、非翻訳領域を改変した原虫を複数作製した。これらの原虫を用い現在シス配列同定を試みている。

这项研究旨在阐明疟原虫寄生虫中膜细胞内寄生虫的分子基础，并使用反向遗传技术分析原生动物基因的表达以及这些基因的功能分析。今年的结果已在下面实现。 1。我们对中肠孢子和唾液腺孢子岩进行了大量分析。分析的EST数量分别为10,000-20,000。将来将公开分析数据。考虑到这一点，我们目前正在研究数据库创建。 2。我们建立了一种在肝细胞感染阶段净化原生动物的方法，并对此阶段进行了EST分析。目前，我们正在分析肝细胞感染30小时后的原生动物。将来，将纯化感染后不同时间的肝内原生动物，并将进行EST分析。我们想分析随着时间的流逝，基因表达的变化，以帮助了解其功能，并阐明肝感染维持机制的整体情况。 3。基于Sporozoite EST分析数据，仅在肝感染后翻译两种类型的基因。当通过免疫电子显微镜检查受感染细胞中的定位时，揭示了原生动物定位于被感染的肝细胞中形成的寄生虫。这些基因被淘汰，并分析了原生动物肝的感染性，原生动物的感染力降至约1/10,000。因此，发现这些基因对于在肝细胞中维持感染很重要。目前，正在使用类似的技术来寻找涉及肝细胞感染的新基因。 4。在mRNA的未翻译区域中，与上述基因调控有关的转化控制元件序列很有可能存在。为了阐明翻译控制机制，产生了几种具有改变未翻译区域的原生动物。我们目前正在尝试使用这些原生动物识别CIS序列。