マラリア肝内型原虫の感染維持機構の解明

阐明肝内疟原虫的感染维持机制

基本信息

批准号：
15019043
负责人：
油田正夫
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019043/
关键词：
マラリアスポロゾイト EST 翻訳制御遺伝子ノックアウト

项目摘要

本研究ではマラリア原虫の肝細胞内寄生の分子的基盤を明らかにすることを目的とし、原虫遺伝子の発現解析、およびそれらの遺伝子の逆遺伝学的手法を用いた機能解析をおこなった。今年度以下の成果を上げた。1.中腸スポロゾイトおよび唾液腺スポロゾイトのESTの大量解析をおこなった。解析したEST数はそれぞれ1-2万である。解析データは今後、一般に公開する予定である。このことを視野に入れて、現在データベース化の作業をおこなっている。2.肝細胞感染ステージの原虫精製法を確立し、このステージのEST解析をおこなった。現在肝細胞感染30時間後の原虫の解析をおこなっている。今後さらに感染後の時間の異なる肝内型原虫を精製し、ESTの解析をおこなう。時間軸での遺伝子発現の変化を解析しその機能を知る手がかりとするとともに、肝臓感染維持機構の全体像を明らかにしたい。3.スポロゾイトEST解析データをもとに肝臓感染後にはじめて翻訳される2種類の遺伝子を同定した。免疫電顕法により感染細胞内での局在を調べたところ両者とも、原虫が感染肝細胞内に形成する寄生胞に局在することが明らかになった。これらの遺伝子をノックアウトし、原虫の肝臓への感染性を解析したとろ、約1万分の1まで感染性が低下した。従ってこれらの遺伝子が肝細胞内での感染維持に重要であることが分かった。現在、同様の手法を用い肝細胞感染に関わる新たな遺伝子を探索中である。4.上に述べた遺伝子の制御に関与する翻訳制御エレメント配列はmRNAの非翻訳領域に存在している可能性が高い。翻訳制御機構を解明する目的で、非翻訳領域を改変した原虫を複数作製した。これらの原虫を用い現在シス配列同定を試みている。

在本研究中，我们旨在阐明疟原虫肝细胞内寄生的分子基础，并利用反向遗传技术对疟原虫基因进行表达分析和这些基因的功能分析。今年我们取得了以下成果。 1. 我们对中肠子孢子和唾液腺子孢子的 EST 进行了大规模分析。分析的 EST 数量为每个 10,000-20,000 个。分析数据未来将向社会公开。考虑到这一点，我们目前正在努力创建一个数据库。 2.建立了肝细胞感染阶段原虫的纯化方法，并进行了该阶段的EST分析。我们目前正在分析肝细胞感染后 30 小时的原虫。未来我们将进一步纯化感染后不同时间的肝内原虫并进行EST分析。我们希望分析基因表达随时间的变化，以提供其功能的线索，并阐明维持肝脏感染的机制的整体情况。 3.根据子孢子EST分析数据，我们鉴定出了两类在肝脏感染后首次翻译的基因。当使用免疫电子显微镜研究感染细胞内的定位时，发现两种原生动物都定位于感染肝细胞内形成的寄生空泡中。当这些基因被敲除并分析寄生虫对肝脏的感染性时，感染性降低到大约1/10,000倍。因此，发现这些基因对于维持肝细胞内的感染很重要。我们目前正在使用类似的方法寻找参与肝细胞感染的新基因。 4.参与上述基因调控的翻译控制元件序列很可能存在于mRNA的非翻译区。为了阐明翻译控制机制，我们创建了多个具有修饰的非翻译区域的原生动物。我们目前正在尝试使用这些原生动物来鉴定顺式序列。