Generation and analysis of elephantized mice for elucidation of carcinogenic resistance mechanisms

大象小鼠的产生和分析用于阐明致癌抗性机制

• 批准号: 22KJ2299
• 负责人: 山崎 匡太郎
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2299/
• 关键词: 発癌抑制; ゾウ化マウス; マウス人工染色体; LIF6; TP53RTG12

ゾウ化マウス、すなわち、ゾウが有する発癌抑制に関わる遺伝子とその制御領域を一括して保持するマウスを作製することで、発癌抑制機構を解析する研究基盤を整備することを目的とする。さらに、発癌抑制機構を備えたモデルマウスを用いて発癌抑制に寄与する新規遺伝子やその機能を解明し、これまで提唱されていない新たな癌予防法のコンセプトの確立に貢献する。以下の4項目に従って研究を実施し、高い発癌抵抗性を有するマウスモデルを確立し解析を行う。項目(1): ゾウの制御領域を持つLIF6がマウス細胞内で動作することを確認。項目(2): ゾウの制御領域を持つTP53RTG12がマウス細胞内で動作することを確認。項目(3): Inhibitory carcinogenesis inhibition-mouse artificial chromosome (CI-MAC)を作製。項目(4): CI-MACを全身に保持しゾウの発癌抑制機構を有するCIマウス作製、発癌 誘導に対する抵抗性を解析。令和4年度は以下の内容を実施した。項目(1)/(3): ゾウ細胞NaNaIからLIF6と制御領域をクローニングし、CHO細胞内のMACへ搭載しCI-MAC(LIF6)を構築した。このCI-MAC(LIF6)をマウスES細胞に移入しmES(LIF6-MAC)を樹立した。クローンの樹立過程においては、搭載したLIF6領域に結合するプローブを用いた染色体解析により、LIF6領域1コピーが搭載されたMACが核内で独立に維持されていることを確認した。さらに、DNAダメージに対してLIF6がマウスの転写因子等による生理的発現制御を受けることを確認するために、DNAダメージを誘導した細胞のLIF発現を定量評価するRT-qPCRを実施した。項目(4): mES(LIF6-MAC)を用いてCI-MAC(LIF6)保持マウスを作製した。

通过创造大象化小鼠，即保留大象及其调节区域中涉及肿瘤抑制的所有基因的小鼠，我们的目标是开发用于分析癌症抑制机制的研究基础设施。此外，通过使用具有肿瘤抑制机制的模型小鼠，我们将阐明有助于肿瘤抑制的新基因及其功能，并有助于建立以前未提出的癌症预防方法的新概念。我们将按照以下四项进行研究，建立并分析高抗癌小鼠模型。第(1)项：确认具有大象控制区域的LIF6在小鼠细胞中发挥作用。第(2)项：确认具有大象控制区域的TP53RTG12在小鼠细胞中发挥作用。项目(3)：创建抑制癌变抑制-小鼠人工染色体(CI-MAC)。项目(4)：全身携带CI-MAC且具有抑制大象癌发生机制的CI小鼠的制作，并分析对癌发生诱导的抵抗力。 2020年度开展了以下活动。项目(1)/(3)：从象细胞NaNaI克隆LIF6和对照区，并将其加载到CHO细胞的MAC中以构建CI-MAC(LIF6)。将该 CI-MAC (LIF6) 转移至小鼠 ES 细胞中以建立 mES (LIF6-MAC)。在克隆建立过程中，使用与加载的 LIF6 区域结合的探针进行染色体分析证实，携带一份 LIF6 区域副本的 MAC 独立维持在细胞核中。此外，为了确认LIF6在响应DNA损伤时受到小鼠转录因子的生理调节，我们进行了RT-qPCR来定量评估诱导DNA损伤的细胞中LIF的表达。项目(4)：使用mES(LIF6-MAC)生成携带CI-MAC(LIF6)的小鼠。

项目成果

ゾウ特異的遺伝子機能を付与したゾウ化マウスの作製と発癌抑制に対する寄与の解析

具有大象特异性基因功能的象鼠的产生及其对肿瘤抑制的贡献分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 山﨑匡太郎;香月康宏
• 通讯作者: 香月康宏

実験医学2023年2月号

实验医学2023年2月号

• 发表时间: 2023
• 作者: 皆木 瞳;山中 賀惠;野原 幹司;大内 淑代;阪井 丘芳;松岡 悠美
• 通讯作者: 松岡 悠美

ゾウの発癌抑制機構解明に向けたゾウ化マウスの作製と解析

大象小鼠的创建和分析以阐明抑制大象致癌的机制

• 发表时间: 2023
• 作者: 山﨑匡太郎;香月康宏
• 通讯作者: 香月康宏