免疫細胞指向性ナノ粒子によるNFkB転写制御と移植拒絶抑制への応用

使用免疫细胞靶向纳米颗粒进行 NFkB 转录控制和移植排斥抑制的应用

基本信息

批准号：
19659037
负责人：
橋田充
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、これまでに開発したキャリアシステムを用いin vivoにおけるNFκB転写制御および移植拒絶抑制への応用展開を行う。移植において血流の一時的な遮断と再開は局所的に活性酸素濃度を増大させ、マクロファージやKupffer細胞などの免疫細胞のNFκB活性化、炎症性サイトカイン産生によりに炎症を誘発する。まず、NFκB活性化抑制可能なNFκBデコイのKupffer細胞選択的送達による虚血際灌流傷害抑制をおこなった。蛍光標識NFκBデコイとフコースリポソームの複合体を肝虚血再灌流モデルマウスへ投与後、組織切片の観察により、投与タイミングによるデリバリー効率の最適化を行ったところ、再灌流1分前投与により肝臓への集積が最も高かった。次に、この投与タイミングで複合体投与後の血清中のサイトカイン(TNFα、IL-1βおよびIL-6)を測定したところ、NFκBデコイ単独投与またはrandomデコイの複合体投与ではサイトカインの抑制効果はほとんど認められなかったが、NFκBデコイの複合体投与において有意な抑制効果が認められた。さらに、組織切片の形態学的観察において、NFκBデコイ複合体を投与したマウスの肝臓にはほとんど炎症部位が認められなかった。また肝炎症の指標である血清中のALT、ASTの上昇もNFκBデコイの複合体により有意に抑制できた。最後に、心移植ラットモデルを作成し、移植により誘発された心組織内のNFκB活性化並びに炎症性サイトカインの産生をmRNAレベルで評価を行ったところ、全身のマクロファージへのデリバリーを目的にNFκBデコイとマンノースリポソームの複合体の投与により有意な抑制効果が認められた。以上、NFκBデコイの免疫細胞指向性キャリアによりNFκBデコイの細胞選択的送達システムを構築し、in vivoでの炎症および移植拒絶におけるNFκB転写制御が可能になった。

今年，我们将利用迄今为止开发的载体系统，将其应用于体内NFκB转录的调控和移植排斥的抑制。移植过程中血流的暂时中断和恢复会局部增加活性氧的浓度，从而通过巨噬细胞和库普弗细胞等免疫细胞中的 NFκB 激活和炎症细胞因子的产生诱导炎症。首先，我们通过选择性地将可抑制 NFκB 激活的 NFκB 诱饵递送至库普弗细胞来抑制缺血期间的灌注损伤。将荧光标记的 NFκB 诱饵和岩藻糖脂质体的复合物给予肝脏缺血再灌注模型小鼠后，我们通过观察组织切片的最高浓度来优化给药效率。接下来，测定了在该给药时机给予复合物后的血清中的细胞因子（TNFα、IL-1β、IL-6），结果发现，单独给予NFκB诱饵复合物或随机诱饵复合物时，细胞因子抑制效果较小。然而，在施用 NFκB 诱饵复合物时观察到显着的抑制作用。此外，在组织切片的形态学观察中，在给予NFκB诱饵复合物的小鼠的肝脏中几乎没有观察到炎症部位。此外，作为肝炎指标的血清 ALT 和 AST 水平的升高被 NFκB 诱饵复合物显着抑制。最后，我们创建了心脏移植大鼠模型，并在 mRNA 水平上评估了移植诱导的心脏组织中 NFκB 的活化和炎症细胞因子的产生，通过给予甘露糖和甘露糖脂质体复合物观察到显着的抑制作用。如上所述，我们使用免疫细胞定向的NFκB诱饵载体构建了NFκB诱饵的细胞选择性递送系统，并使得在体内炎症和移植排斥中控制NFκB转录成为可能。