リボソーム技術を応用した新規細胞特異的遺伝子送達法の開発

应用核糖体技术开发新型细胞特异性基因传递方法

基本信息

批准号：
11F01791
负责人：
橋田充
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、細胞選択的送達が可能な新規超音波応答性糖鎖修飾バブルリポソームの開発である。まず、がんや炎症部位の血管内皮細胞の表面に高発現するEセレクチンのリガンドであるシアリルルイスX (sLeX)を表面に修飾したリポソームを調製し、血管内皮細胞との結合量の評価を行った。血管内皮細胞にTNFalphaのみを作用させた場合とTNFalpahとI1-1bを作用させた場合では、Eセレクチンの発現量は後者の方が多かった。そこで、sLeX修飾脂質の含有量が全脂質の3または6%のsLeX修飾リボソームを調製し、Eセレクチンの発現量が異なる細胞へそれぞれ添加し、結合量を評価した。その結果、レセプター発現の低い細胞に対する3%修飾リボソームの結合量に対し、6%修飾リボソームは1.31倍、発現の高い細胞に対する3%または6%修飾リボソームの結合量はそれぞれ1,35倍、L75倍であった。レセプターの発現量が多い程、またsLeX修飾量が高い程結合量が高かった。また、ターゲティングを利用した超音波イメージングによる診断への応用を目指し、液化perflurocarbons (PFS)(perfluoropentane and-hexane)を常圧でも長期間安定に封入できるリポソームに対して超音波照射を行い、気化されたガスを超音波イメージングで撮影した。2.0W/cm2で1分間照射したところ、わずかなシグナルしか検出できなかったが、5.0W/cm2で照射するとシグナルは徐々に増加し、1分後のシグナルは2.0W/cm2の場合の約7倍で、十分検出できる値であった。以上、がんや炎症の血管内皮細胞をターゲットとしたsLeX修飾リポソームの調製法ならびに超音波診断への応用に必要な安定にPFSを含有するリポソームの調製法を確立した。

本研究的目的是开发新型超声响应糖基化气泡脂质体，可以选择性地递送至细胞。首先，我们制备了表面用唾液酸路易斯修饰的脂质体。当单独将TNFα应用于血管内皮细胞时以及当应用TNFα和I1-1b时，后一种情况下E-选择素的表达水平较高。因此，制备含有sLeX修饰脂质总脂质含量的3％或6％的sLeX修饰核糖体，将其添加到表达不同量的E-选择素的细胞中，并评价结合量。结果，3%修饰核糖体与低受体表达细胞的结合量是6%修饰核糖体的1.31倍，3%或6%修饰核糖体与高受体表达细胞的结合量是1.35倍，分别是L75和L75的两倍。受体表达水平越高、sLeX修饰量越高，结合量越高。此外，为了将超声波成像应用于靶向诊断，我们通过超声波照射，用即使在常压下也能长时间稳定封装的液化全氟化碳（PFS）（全氟戊烷和己烷）照射脂质体。使用超声波成像对气体进行拍照。当以2.0W/cm2照射1分钟时，只能检测到轻微的信号，但以5.0W/cm2照射时，信号逐渐增强，1分钟后的信号约为7，是足够可检测的值。如上所述，我们建立了一种制备针对癌症和炎症中血管内皮细胞的sLeX修饰脂质体的方法，以及制备稳定含有PFS的脂质体的方法，这对于超声诊断的应用是必需的。