活性酸素消去酵素の細胞選択的ターゲティング・遺伝子導入によるがん転移抑制

通过细胞选择性靶向活性氧清除酶和基因转移抑制癌症转移

基本信息

批准号：
15025233
负责人：
橋田充
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

カタラーゼ(CAT)の標的部位選択的デリバリーによる癌転移抑制メカニズムの解明ならびに癌転移治療法の確立を目的として、マウスメラノーマ細胞B16-BL6にホタルルシフェラーゼ遺伝子をコードしたプラスミドDNAを導入することにより、ルシフェラーゼを安定に発現する癌細胞株B16-BL6/Lucを作成した。作成した癌細胞株のルシフェラーゼ活性を指標に、定量的かつ速度論的に評価可能な新規癌転移解析法を開発し、CAT誘導体による転移抑制機構の解明ならびに治療効果の増大を試みた。B16-BL6/Luc細胞をマウスfootpadに移植し、肺への遠隔転移を生じる自然転移モデルにおいて、投与24時間後にはすでに肺中に癌細胞が検出され、その数は経時的に増大した。このとき、癌原発部位を切除することにより肺微小転移巣の癌細胞の急激な増殖が認められたが、癌原発部位切除直前にCAT誘導体、特に血中滞留型PEG-CATの投与により著明な癌細胞増殖抑制効果が認められた。癌原発巣の切除により、異所腫瘍組織での血管新生は亢進したが、これもPEG-CAT投与により顕著に抑制された。また、培養したマウス結腸癌細胞colon26とマウスから採取した肝実質細胞およびマクロファージとを共培養することで、マクロファージから大量の活性酸素が生成することが示され、これに伴い肝実質細胞がMMP-9を過剰に産生することが明らかとなった。このとき、CATを添加することでMMP活性の上昇は著しく抑制された。

为了阐明通过靶向位点选择性递送过氧化氢酶（CAT）抑制癌症转移的机制并建立癌症转移的治疗方法，我们将编码萤火虫荧光素酶基因的质粒 DNA 引入小鼠黑色素瘤细胞 B16-BL6。稳定表达B16-BL6/Luc的癌细胞系B16-BL6/Luc。我们开发了一种新型癌症转移分析方法，可以使用所创建的癌细胞系的荧光素酶活性作为指标进行定量和动力学评估，并试图阐明转移抑制机制并提高CAT衍生物的治疗效果。在将B16-BL6/Luc细胞移植到小鼠足垫并引起肺部远处转移的自发转移模型中，给药24小时后肺部就已经检测到癌细胞，并且其数量随着时间的推移而增加。此时，在切除原发癌症部位后观察到肺微转移中癌细胞的快速增殖，但当在切除原发癌症部位之前立即施用CAT衍生物，尤其是血液保留的PEG-CAT时，这种情况变得更加明显。观察到对癌细胞增殖的抑制作用。原发肿瘤的切除促进了异位肿瘤组织中的血管生成，但这也被 PEG-CAT 给药显着抑制。另外，通过将培养的小鼠结肠癌细胞colon26与从小鼠采集的肝细胞和巨噬细胞共培养，结果表明，巨噬细胞产生大量活性氧，结果，肝细胞产生了9个活性氧。过量。此时，通过添加CAT，MMP活性的增加被显着抑制。