インターロイキン21とその受容体発現に対するエピジェネティックな制御系の解析

白细胞介素21表观遗传调控系统及其受体表达分析

基本信息

批准号：
17659139
负责人：
浅尾裕信
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659139/
关键词：
エピジェネティクスサイトカイン自己免疫疾患

项目摘要

IL-21は多様な生物活性を示すサイトカインであるが、発現制御機構に関しては不明である。自己免疫性糖尿病を発症するNODマウスではIL-21の産生亢進が自己反応性T細胞の増殖に寄与する可能性が報告された。本研究ではNODマウスでのIL-21遺伝子の発現制御機構、特にDNAメチル化によるエピジェネティックな制御系について解析した。1.初めに、DNAメチル化阻害剤5-アザシチジン(5-aza-C)を用いて、IL-21発現に対する影響を調べた。PMAとionomycine刺激マウスTリンパ腫RL♂1に5-aza-Cを添加したところ、IL-21の発現が亢進した。一般に転写制御領域のDNAメチル化によりサイトカイン産生は抑制されるが、IL-21においてもその発現がDNAメチル化により抑制されていることが明らかとなった。2.IL-21遺伝子プロモーター領域のCpGモチーフDNAメチル化の解析:bisulfite処理法によりNODマウスとC57BL/6マウスのT細胞ゲノムDNAのCpGモチーフメチル化を解析した。C57BL/6マウスと比べ、いくつかのCpGモチーフがNODマウスではメチル化されていないことが判明した。それぞれのIL-21遺伝子のプロモーター領域の塩基配列を解読したところ、このメチル化パターンの相違の多くはCpG部分のSNPが原因であることが判明した。3.IL-21転写活性化に及ぼすCpGメチル化の解析:それぞれのマウスのIL-21遺伝子プロモーター領域をレポータープラスミドにクローニングした。in vitroでCpGメチル化したレポータープラスミドをマウスT細胞株に導入し、PMAとIonomycinで刺激し転写活性化を解析した結果、NODマウス由来のレポーター遺伝子活性化がC57BL/6マウス由来のものよりやや高くなる傾向はみられたが、明らかな差異は認められなかった。

IL-21是一种具有多种生物活性的细胞因子，但其表达控制机制尚不清楚。据报道，IL-21 产生的增加可能有助于患自身免疫性糖尿病的 NOD 小鼠中自身反应性 T 细胞的增殖。在本研究中，我们分析了NOD小鼠IL-21基因表达的控制机制，特别是DNA甲基化的表观遗传控制系统。 1. 首先，我们使用DNA甲基化抑制剂5-氮杂胞苷（5-aza-C）来检测其对IL-21表达的影响。当将 5-aza-C 添加到 PMA 和离子霉素刺激的小鼠 T 淋巴瘤 RL♂1 中时，IL-21 表达增加。细胞因子的产生通常受到转录控制区DNA甲基化的抑制，并且已经清楚IL-21的表达也受到DNA甲基化的抑制。 2.IL-21基因启动子区CpG基序DNA甲基化分析：采用亚硫酸氢盐处理法分析NOD小鼠和C57BL/6小鼠T细胞基因组DNA中CpG基序甲基化。与 C57BL/6 小鼠相比，NOD 小鼠中的几个 CpG 基序的甲基化程度较低。当对各个IL-21基因启动子区的碱基序列进行解码后，发现许多甲基化模式的差异是由CpG区的SNP引起的。 3、CpG甲基化对IL-21转录激活的影响分析：将每只小鼠的IL-21基因启动子区克隆到报告质粒中。我们在体外将 CpG 甲基化报告质粒引入小鼠 T 细胞系，用 PMA 和离子霉素刺激它，并分析转录激活结果，NOD 小鼠的报告基因激活略高于 C57BL/6 小鼠。尽管有增加的趋势，但没有观察到明显的差异。