低分子量Gタンパク質Rabをゲノムワイドで網羅的に解析するツールの開発

开发低分子量 G 蛋白 Rab 的全面全基因组分析工具

基本信息

批准号：
17657067
负责人：
福田光則
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tohoku University (2006)The Institute of Physical and Chemical Research (2005)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

真核細胞生物の細胞内はさらに膜で包まれたオルガネラにより満たされており、主に膜輸送を介してオルガネラ同士で頻繁に物質のやり取りを行っている。低分子量Gタンパク質Rabファミリーは膜輸送に関与する分子群としては最大のもめで、哺乳動物においては約60種類ものアイソフォームが存在している。各々のRabは特定の膜輸送を制御すると考えられているが、12番以降のRabアイソフォームになるといつどこで何を運ぶのかに関してはほとんど解明されていない。Rabは活性化型固定化(domihant active, DA)変異体あるいは不活性化型固定化(dominant negative, DN)変異体を作成することが出来るため、特走の膜輸送に対する影響を検討することが可能であるが、ある種の受容体が未知のRabにより細胞膜に輸送される場合には、60種類全てのRabクローンに対してDA/DN変異体を作成する必要があり、60種類のうちどのRabが関与するのかを調べることはこれまで不可能であった。このため世界的にRabを綢羅的に解析するツールのニーズが高まってきている。そこで本研究ではマウス及びヒトに存在する60種類のRabを全てクローニングし、これらのRabの機能を網羅的に解析するツーノレ(「Rab bank」)を作成することを目指した。本年度は、これまでに作成したRabの網羅的廨析ツールを利用し、実際に内分泌細胞(PC12細胞)からのホルモン分泌に関わるRabのスクリーニングを行った。その結果、60種類のRabのうちPC12細胞のホルモン顆粒上にはRab3AとRab27Aの二種類のRabが存在し、お互いに協調的にホルモン顆粒の細胞膜へめ繋ぎ止めやホルモンの放出に関与することを明らかにすることができた(J. Cell Scl.(2006)119:2196-2203)。

真核细胞内部还充满了膜包裹的细胞器，细胞器之间主要通过膜运输频繁地进行物质交换。 Rab 低分子量 G 蛋白家族是参与膜运输的最具争议的分子组，在哺乳动物中存在约 60 种亚型。尽管每个 Rab 被认为控制特定的膜转运，但人们对 Rab 亚型超出 12 种转运的时间、地点和内容知之甚少。 Rab 是一种激活的固定化（显性活性，DA）突变体或失活的固定化（显性失活， DN）由于可以创建突变体，因此可以检查Tokusou对膜运输的影响，但是如果某种类型的受体被未知的Rab运输到细胞膜，则需要创建60种DA/所有 Rab 克隆都有 DN 突变体，以前不可能调查 60 种类型中的哪一种 Rab 涉及其中。因此，世界各地对全面分析 Rab 的工具的需求日益增长。因此，在这项研究中，我们的目标是克隆小鼠和人类体内存在的全部60种Rab，并创建一个“Rab库”来全面分析这些Rab的功能。今年，我们实际上利用迄今为止创建的综合 Rab 分析工具筛选了参与内分泌细胞（PC12 细胞）激素分泌的 Rab。结果，在 60 种 Rab 中，PC12 细胞的激素颗粒上存在两种 Rab，Rab3A 和 Rab27A，它们相互配合将激素颗粒锚定在细胞膜上并释放激素（J.细胞科学（2006）119：2196-2203）。

项目成果

期刊论文数量（39）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Neuronal calcium sensor-1 (NCS-1) and PI4Kβ stimulate ERK1/2 signaling by accelerating recycling through endocytic recycling compartment (ERC).

神经元钙传感器-1 (NCS-1) 和 PI4Kβ 通过内吞回收室 (ERC) 加速回收来刺激 ERK1/2 信号传导。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Mol. Biol. Cell 17
影响因子：
0
作者：
Kapp-Barnea;Y.;Ninio-Many;L.;Hirschberg;K.;Fukuda;M.;Jeromin;A.;Sagi-Eisenberg;R.
通讯作者：
R.

Functional analysis of Slac2-a/melaonophilin as a linker protein between Rab27A and myosin Va in melanosome transport.

Slac2-a/melaonophilin 作为 Rab27A 和肌球蛋白 Va 在黑素体运输中的连接蛋白的功能分析。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Methods Enzymol. 403
影响因子：
0
作者：
Kuroda;T.S.;Itoh;T.;Fukuda M.
通讯作者：
Fukuda M.

Protein kinase C-mediated phosphorylation of the two polybasic regions of synaptotagmin VI regulates their function in acrosomal exocytosis.

DOI：
10.1016/j.ydbio.2005.07.007
发表时间：
2005-09
期刊：
Developmental biology
影响因子：
2.7
作者：
Carlos M. Roggero;C. Tomes;G. D. De Blas;Jimena Castillo;M. Michaut;M. Fukuda;L. Mayorga
通讯作者：
Carlos M. Roggero;C. Tomes;G. D. De Blas;Jimena Castillo;M. Michaut;M. Fukuda;L. Mayorga

Assay of Rab binding specificity of rabphilin and Noc2 : Target molecules for Rab27.

rabphilin 和 Noc2 的 Rab 结合特异性测定：Rab27 的靶分子。