迅速Rab-GAPスクリーニング法の開発

Rab-GAP快速筛选方法的开发

基本信息

批准号：
18057026
负责人：
福田光則
金额：
$ 3.97万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

低分子量G蛋白質Rabはヒトにおいて60種類以上もの異なるアイソフォームが存在し、個々のRabはオルガネラ特異的あるいは細胞種特異的に膜輸送を制御すると考えられている。RabはGTPと結合している活性化型、GDPと結合している不活性化型の二つのフォームをとり、活性化型のGTP-Rabが特定の標的因子と結合することで膜輸送を促進する。適切なRabの不活性化はRabの正常な機能発現に不可欠と考えられており、Rabの不活性化酵素としてGAP(GTPase-activating protein)の存在が提唱されている。しかしながら、ヒトに数多く存在するRabのうち特定のGAPが同定されているものはほとんどなく、Rab不活性化の分子メカニズムは未だ謎に包まれている。そこで本研究では、Rabに特異的な不活性化酵素GAPを迅速にスクリーニングする手法の確立に取り組んだ。これまでの研究でメラノソーム輸送を司るRab27Aに着目し、Rab27Aエフェクタードメイン(Slac2-aのSHD領域)による活性化型GTP-Rab27Aの測定法を開発するとともに、メラノソーム輸送阻害活性を指標とてTBCドメインを有する二種類の蛋白質Rab27A-GAPα及びβを同定することに成功した。本年度はさらに、インスリン刺激依存的に細胞膜に輸送されるグルコース輸送体4の制御に関わるAS160という分子が、Rab10-GAPとして機能することを突き止めた(Cell Metab.(2007)5,293-303)。

Rab（一种低分子量 G 蛋白）在人类中有 60 多种不同的亚型，每种 Rab 都被认为以细胞器特异性或细胞类型特异性的方式调节膜转运。 Rab 有两种形式：一种是与 GTP 结合的活化形式，另一种是与 GDP 结合的非活性形式，活化的 GTP-Rab 通过与特定的靶因子结合来促进膜转运。 Rab 的适当失活被认为对于 Rab 的正常功能表达至关重要，并且 GAP（GTP 酶激活蛋白）的存在已被提议作为 Rab 失活酶。然而，在人类体内存在的众多Rab中，很少有被鉴定出特异性GAP的，并且Rab失活的分子机制仍然笼罩在神秘之中。因此，在本研究中，我们致力于建立一种快速筛选Rab特异性失活酶GAP的方法。在我们之前的研究中，我们关注控制黑素体运输的 Rab27A，并开发了一种使用 Rab27A 效应结构域（Slac2-a 的 SHD 区域）以及使用黑素体运输抑制活性的 TBC 结构域测量激活的 GTP-Rab27A 的方法作为指标，我们成功鉴定了两种类型的蛋白质：Rab27A-GAPα和β，它们具有以下特性。今年，我们进一步发现一种名为AS160的分子，参与葡萄糖转运蛋白4的调节，以胰岛素刺激的方式转运至细胞膜，其功能与Rab10-GAP一样（Cell Metab. (2007)） 5、293-303）。

项目成果

期刊论文数量（42）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Proteomic analysis of insulin secretory granules.

胰岛素分泌颗粒的蛋白质组学分析。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Mol. Cell. Proteomics 6
影响因子：
0
作者：
Brunner. Y.;Coute;Y.;Iezzi;M.;Foti. M.;Fukuda;M.;Hochstrasser;D.;Wollheim;C.B. & Sanchez. J.-C.
通讯作者：
C.B. & Sanchez. J.-C.

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突触结合蛋白的分子进化