トランスポーター発現アデノウイルスベクターを用いた薬物の能動的組織デリバリー

使用表达转运蛋白的腺病毒载体主动组织递送药物

基本信息

批准号：
16659037
负责人：
辻彰
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、薬物輸送能を有するトランスポーター遺伝子あるいはアンチセンス配列を臓器にin vivoで導入する発現ベクターを構築し、薬物の特異的かつ能動的な組織送達が可能であるかを検証するものである。しかし、このためにはin vitro系における厳密な検討が必要であり、このため、本年度は、トランスポーター遺伝子発現用ベクターに代表的トランスポーターであるペプチド・トランスポーター遺伝子(PEPT1、PEPT2、HPT1)遺伝子を組み込み、これらの機能を培養細胞発現系で解析した。PEPT1はβ-ラクタム系抗生物質などの腸管取り込み輸送に大きな役割を有していると考えられるが、特にセファレキシン輸送時には、「ペプチダーゼ様活性」の存在が示唆された。PEPT1のこのようなペプチダーゼ活性は他のペプチドトランスポーター(PEPT2、HPT1)などと比して、非常に大きいものであった。このペプチダーゼ活性は、種々のペプチダーゼインヒビターによって阻害を受けた。このことは、個体(in vivo)においてPEPT1を利用した組織特異的薬物デリバリーに至適な薬物をデザインする際に重要な知見であると考えられる。これまでのところ、ペプチダーゼのような消化酵素活性を有するトランスポーター群は知られておらず、その作動機序には大きな関心が寄せられる。しかしながら、PEPT1の輸送機能およびペプチダーゼ用活性の解明は、培養細胞発現系のみでの解析系では限界であると考えられる。酵素活性がトランスポーターに由来するものか?あるいは、発現によって誘導されたものかは明確とは言えないため、今後は、これまでに我々が構築してきた発現系を利用したトランスポータータンパク質の精製・再構成および機能解析が必須と考えられ、現在、その検討に向けて準備段階にある。

本研究旨在构建能够将药物转运至体内器官的转运基因或反义序列的表达载体，并验证药物是否可以进行特异性、主动的组织递送。然而，这需要在体外系统中进行严格的研究，因此，今年我们将使用代表性转运蛋白肽转运蛋白基因（PEPT1、PEPT2、HPT1）作为转运蛋白基因表达载体，并研究其功能。使用培养细胞表达系统进行分析。 PEPT1被认为在β-内酰胺抗生素的肠道摄取和转运中发挥着重要作用，并且表明存在“肽酶样活性”，特别是在头孢氨苄转运期间。与其他肽转运蛋白（PEPT2、HPT1）相比，PEPT1 的肽酶活性非常大。这种肽酶活性被多种肽酶抑制剂抑制。这被认为是在个体（体内）使用 PEPT1 设计用于组织特异性药物递送的最佳药物时的一个重要发现。迄今为止，尚不知道具有肽酶等消化酶活性的转运蛋白基团，其作用机制引起了极大的兴趣。然而，PEPT1 的转运功能和肽酶活性的阐明被认为受到仅使用培养细胞表达系统的分析系统的限制。由于尚不清楚该酶活性是来自转运蛋白还是由表达诱导，因此我们将继续使用我们迄今为止构建的表达系统来纯化和纯化转运蛋白，重建和功能分析被认为是必要的和重要的。目前正处于筹备阶段。