エンドソームにおけるユビキチン化蛋白質の選別機構とその制御

内体中泛素化蛋白的分选机制及其调控

基本信息

批准号：
16657054
负责人：
喜多村直実
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

エンドソームはエンドサイトーシスされた細胞膜上の受容体のうち、リソソームに運ばれ分解される受容体と細胞膜にリサイクルされる受容体を選別するオルガネラである。この選別において受容体のユビキチン化が、その受容体がリソソームへ輸送されるための選別シグナルとして機能している。本研究ではエンドソームにおけるユビキチン化蛋白質の選別制御における脱ユビキチン化酵素UBPYの役割を解析し、以下の結果を得た。1.酵素活性を欠損したUBPYをHeLa細胞に過剰発現したところ、ユビキチン化蛋白質が初期エンドソームに蓄積した。またこの蓄積はsiRNAによりUBPYをknockdownした細胞においても観察された。さらにユビキチン化蛋白質が蓄積したエンドソームは異常な形態を示した。そこでこの形態について電子顕微鏡を用いて詳細に解析したところ、エンドソームの異常な形態はエンドソームが凝集することによって起ることが明らかになった。これらの結果は、UBPYはエンドソームにおいて蛋白質のユビキチン化レベルを調節し、それによりエンドソームの形態が維持されていることを示唆している。2.エンドソームにおける選別制御に関わる蛋白質のいくつかは自身がユビキチン化されることが知られている。そこでUBPYがこれらのユビキチン化の調節に関わっているかを解析した。酵素活性を欠損したUBPYを過剰発現した細胞およびUBPYをknockdownした細胞においてEps15蛋白質のユビキチン化レベルが上昇した。またこれらの細胞において、Eps15はエンドソームに蓄積してくることが観察された。これらの結果は、Eps15はUBPYの基質の1つであり、UBPYはそのユビキチン化レベルを調節することによりエンドソームにおける選別制御に関わっていることを示唆している。

内体是在细胞膜上的内吞受体和再循环回细胞膜的受体之间进行选择的细胞器，这些受体被转运到溶酶体并降解。在这种选择中，受体泛素化充当将受体转运至溶酶体的选择信号。在本研究中，我们分析了去泛素化酶UBPY在内体中调节泛素化蛋白分选的作用，并得到了以下结果。 1.当缺乏酶活性的UBPY在HeLa细胞中过度表达时，泛素化蛋白在早期内体中积累。在 UBPY 被 siRNA 敲除的细胞中也观察到这种积累。此外，具有积累的泛素化蛋白的内体表现出异常的形态。使用电子显微镜对该形态进行详细分析表明，内体的异常形态是由内体聚集引起的。这些结果表明 UBPY 调节内体中蛋白质泛素化水平，从而维持内体形态。 2. 众所周知，一些参与内体分选控制的蛋白质本身是泛素化的。因此，我们分析了UBPY是否参与调节这些泛素化过程。在过度表达缺乏酶活性的 UBPY 的细胞和在 UBPY 被敲低的细胞中，Eps15 蛋白的泛素化水平增加。此外，在这些细胞中，观察到 Eps15 在内体中积累。这些结果表明Eps15是UBPY的底物之一，UBPY通过调节其泛素化水平参与内体分选的调节。

项目成果

期刊论文数量（24）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Enhanced JNK activation by NESK without kinase activity upon caspase-mediated cleavage during apoptosis

DOI：
10.1016/j.cellsig.2005.03.004
发表时间：
2005-11-01
期刊：
CELLULAR SIGNALLING
影响因子：
4.8
作者：
Kakinuma, H;Inomata, H;Kitamura, N
通讯作者：
Kitamura, N

Activation of c-Met (hepatocyte growth factor receptor) in human gastric cancer tissue

DOI：
10.1111/j.1349-7006.2004.tb02185.x
发表时间：
2004-10-01
期刊：
CANCER SCIENCE
影响因子：
5.7
作者：
Inoue, T;Kataoka, H;Miyazawa, K
通讯作者：
Miyazawa, K

Regulation of EGF receptor downregulation by UBPY-mediated deubiquitination at endosomes

UBPY 介导的内体去泛素化调节 EGF 受体下调

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Mol.Biol.Cell 16
影响因子：
0
作者：
Moriyama-Kita M;et al.;佐藤博;E. Shirako;A. Kondo;E. Mizuno;M.Nakamura;E.Mizuno;M.Maemura;A.Yamasaki;M.Nakamura;M.Komada;H.Kakinuma;H.Tanaka;J.Han;E.Mizuno
通讯作者：
E.Mizuno

The Hrs/STAM complex in the downregulation of receptor tyrosine kinases

DOI：
10.1093/jb/mvi001
发表时间：
2005-01-01
期刊：
JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
影响因子：
2.7
作者：
Komada, M;Kitamura, N
通讯作者：
Kitamura, N

Involvement of down regulation of Cdk2 activity in hepatocyte growth factor-induced cell cycle arrest at G1 in the human hepatocellular carcinoma cell line HepG2

Cdk2活性下调参与肝细胞生长因子诱导的人肝癌细胞系HepG2细胞周期阻滞在G1期

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J.Biochem. 136
影响因子：
0
作者：
Kano;F.;山内忍;村田昌之;Fumi Kano;Fumi Kano;Satomi Nadanaka;J.Ichinose;加納ふみ;加納ふみ;田中亜路;M.Nakamura;M.Komada;H.Kakinuma;H.Tanaka;J.Han;E.Mizuno;T.Hori;E.Mizuno;C.Morino;H.Itoh;T.Inoue;Y.Tsukada
通讯作者：
Y.Tsukada