がん細胞の分化・極性の制御と増殖因子受容体

癌细胞分化、极性和生长因子受体的调节

基本信息

批准号：
17014032
负责人：
喜多村直実
金额：
$ 18.82万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17014032/
关键词：
がん細胞の分化.極性増殖因子受容体 HGF受容体(c-Met)細胞周期 Cdkインヒビター増殖因子受容体のユビキチン化脱ユビキチン化酵素 UBPY EGF 受容体がん細胞の分化・極性シグナル伝達脱ユビキチン化酵素UBPY エンドソーム選別輸送

项目摘要

がん細胞の分化・極性の制御に関わる増殖因子受容体のシグナル伝達および細胞内局在について解析し、以下の結果を得た。1.がん細胞の分化制御の機構を理解するためには、G1期での細胞周期の停止のメカニズムを明らかにすることが重要である。 HGFはその受容体c-Metを介して肝がん由来細胞株HepG2に作用し、細胞周期をG1期で停止することにより増殖を抑制する。このG1期での細胞周期の停止にはCdkインヒビターp16の発現上昇が必要である。 P16の発現制御には転写因子Etsが重要であることから、本研究ではEtsの活性化を負に制御する因子であるId1の解析を行った。 HepG2細胞ではId1の発現が高い状態にあり、HGF刺激により発現が減少した。またId1の過剰発現によりHGF刺激によるp16の発現上昇が抑制された。さらにId1をノックダウンした細胞ではp16の発現上昇はみられなかったが、同時にEtsのリン酸化を促進するとp16の発現が上昇した。これらの結果から、HGF刺激によるp16の発現上昇にはId1の発現減少が必要であることが明らかになった。2.がん細胞における極性の変化と増殖因子受容体の局在は密接に関係し、その局在にはユビキチン化が重要である。本研究ではEGF受容体のユビキチン化レベルを抑制している脱ユビキチン化酵素UBPYについて活性調節機構を解析した。UBPYと共免疫沈降する蛋白質を探索したところ、14-3-3蛋白質が同定された。In vitroにおけるUBPYの脱ユビキチン化活性は、過剰の14-3-3を加えることにより抑制された。さらに14-3-3と結合できない変異型UBPYを過剰発現した細胞におけるEGF受容体のユビキチン化レベルが野生型UBPYに比べて減少した。これらの結果はUBPYの脱ユビキチン化酵素活性は14-3-3により抑制されていることを示している。

分析了参与癌细胞分化和极性调节的生长因子受体的信号传导和亚细胞定位，并获得了以下结果。 1。要了解癌细胞分化调节的机制，重要的是要阐明G1期间细胞周期停滞的机制。 HGF通过其受体C-MET作用于肝癌衍生的细胞系HEPG2，并通过在G1期阻止细胞周期来抑制增殖。 G1相中的这种细胞周期停滞需要增加CDK抑制剂p16的表达。由于转录因子ET对于控制p16的表达很重要，因此在这项研究中，ID1分析了对ETS激活进行负调控ETS激活的因素。 HEPG2细胞具有高度表达ID1，HGF刺激降低了表达。此外，ID1的过表达抑制了由HGF刺激引起的p16表达的增加。此外，尽管在击倒ID1的细胞中未观察到p16表达的增加，但同时促进ETS磷酸化增加了p16的表达。这些结果表明，通过HGF刺激，p16表达的增加需要降低ID1的表达。 2。癌细胞的极性变化和生长因子受体的定位密切相关，泛素化对于其定位很重要。在这项研究中，分析了Ubpy的活性调节的机理，Ubpy是一种抑制EGF受体泛素化水平的去泛素酶。当我们搜索与Ubpy共免疫沉淀的蛋白质时，确定了14-3-3蛋白。通过添加过量14-3-3，可以抑制Ubpy在体外的去泛素化活性。此外，与野生型Ubpy相比，过表达与14-3-3的过表达突变体Ubpy的EGF受体的泛素化水平降低了。这些结果表明，Ubpy的去泛素酶活性被14-3-3抑制。