がん細胞の分化・極性の制御と増殖因子受容体

癌细胞分化、极性和生长因子受体的调节

基本信息

批准号：
17014032
负责人：
喜多村直実
金额：
$ 18.82万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17014032/
关键词：
がん細胞の分化.極性増殖因子受容体 HGF受容体(c-Met)細胞周期 Cdkインヒビター増殖因子受容体のユビキチン化脱ユビキチン化酵素 UBPY EGF 受容体がん細胞の分化・極性シグナル伝達脱ユビキチン化酵素UBPY エンドソーム選別輸送

项目摘要

がん細胞の分化・極性の制御に関わる増殖因子受容体のシグナル伝達および細胞内局在について解析し、以下の結果を得た。1.がん細胞の分化制御の機構を理解するためには、G1期での細胞周期の停止のメカニズムを明らかにすることが重要である。 HGFはその受容体c-Metを介して肝がん由来細胞株HepG2に作用し、細胞周期をG1期で停止することにより増殖を抑制する。このG1期での細胞周期の停止にはCdkインヒビターp16の発現上昇が必要である。 P16の発現制御には転写因子Etsが重要であることから、本研究ではEtsの活性化を負に制御する因子であるId1の解析を行った。 HepG2細胞ではId1の発現が高い状態にあり、HGF刺激により発現が減少した。またId1の過剰発現によりHGF刺激によるp16の発現上昇が抑制された。さらにId1をノックダウンした細胞ではp16の発現上昇はみられなかったが、同時にEtsのリン酸化を促進するとp16の発現が上昇した。これらの結果から、HGF刺激によるp16の発現上昇にはId1の発現減少が必要であることが明らかになった。2.がん細胞における極性の変化と増殖因子受容体の局在は密接に関係し、その局在にはユビキチン化が重要である。本研究ではEGF受容体のユビキチン化レベルを抑制している脱ユビキチン化酵素UBPYについて活性調節機構を解析した。UBPYと共免疫沈降する蛋白質を探索したところ、14-3-3蛋白質が同定された。In vitroにおけるUBPYの脱ユビキチン化活性は、過剰の14-3-3を加えることにより抑制された。さらに14-3-3と結合できない変異型UBPYを過剰発現した細胞におけるEGF受容体のユビキチン化レベルが野生型UBPYに比べて減少した。これらの結果はUBPYの脱ユビキチン化酵素活性は14-3-3により抑制されていることを示している。

我们分析了生长因子受体的信号转导和细胞内定位，这些受体参与癌细胞分化和极性的调节，并获得了以下结果。 1. 为了理解癌细胞分化控制的机制，阐明细胞周期停滞在G1期的机制非常重要。 HGF 通过其受体 c-Met 作用于肝癌来源的细胞系 HepG2，通过将细胞周期阻滞在 G1 期来抑制增殖。这种细胞周期停滞在 G1 期需要增加 Cdk 抑制剂 p16 的表达。由于转录因子 Ets 对于调节 P16 的表达很重要，因此在本研究中我们分析了 Id1，这是一种负向调节 Ets 激活的因子。在HepG2细胞中，Id1表达高，并且在HGF刺激后表达降低。此外，Id1 的过度表达抑制了 HGF 刺激诱导的 p16 表达的增加。此外，在Id1被敲低的细胞中没有观察到p16表达增加，但当同时促进Ets磷酸化时p16表达增加。这些结果表明，HGF 刺激诱导的 p16 表达增加需要 Id1 表达减少。 2.癌细胞极性的变化与生长因子受体的定位密切相关，泛素化对其定位很重要。在本研究中，我们分析了去泛素化酶UBPY的活性调节机制，该酶抑制EGF受体的泛素化水平。当寻找与 UBPY 免疫共沉淀的蛋白质时，鉴定出了 14-3-3 蛋白质。添加过量的14-3-3可抑制UBPY的体外去泛素化活性。此外，与野生型UBPY相比，过表达不能结合14-3-3的突变体UBPY的细胞中EGF受体泛素化水平降低。这些结果表明 UBPY 的去泛素化酶活性被 14-3-3 抑制。