Nijmegen症候群バリアントの不死化細胞株の樹立と病因の解明

永生化细胞系的建立及奈梅亨综合征变异体发病机制的阐明

基本信息

批准号：
15659078
负责人：
松浦伸也
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

2001年に山田らは新しい染色体断裂症候群を報告した。患者は非血縁結婚から生まれた12歳の日本人女児で、進行性の重度小頭症と多指症・低身長を示した。著明なリンパ球減少と免疫グロブリン低下を伴う複合型免疫不全を呈し、幼児期から慢性感染症を繰り返していた。患者リンパ球は、染色体核型は46,XXで正常だが、放射線照射後に染色体分体型のギヤップおよび断裂などの構造異常が多発し、ナイミーヘン症候群と同程度に放射線高感受性を示した。しかしながら鳥様顔貌は見られずNBS1遺伝子に変異を認めなかった。以上から新しいタイプのナイミーヘン症候群バリアントと診断した。その後、女児は悪性リンパ腫を発症し、本疾患が高発癌性遺伝病であることが強く疑われた。本研究は患者不死化線維芽細胞株を樹立して、本疾患の病因を解明することを目的としている。本研究により以下の点を明らかにした。1.患者皮膚線維芽細胞に、テロメア触媒サブユニットhTERTをレトロウイルスベクターで導入し、SV40ウイルスを感染させて不死化細胞株を樹立した。得られた不死化細胞株について、コロニー形成法で放射線感受性をアッセイした。患者細胞はナイミーヘン症候群細胞と同程度の放射線致死感受性を示すことが確認された。2.NBS1に関連する各種DNA修復蛋白について、ウエスタンブロット法で異常の有無を検索した。NBS1ならびにその複合体のサブユニットであるhMRE11とhRAD50の発現あるいは蛋白サイズに異常を認めなかった。さらに、免疫染色法によるDNA修復蛋白の核内フォーカスを観察したが、いずれも正常に核内フォーカスを形成することが確認された。3.現在、原因染色体の特定を目的にヒト染色体ライブラリーを移入して機能的試験を進めている。今後の機能的相補性試験による遺伝子マッピングが期待される。

2001年，Yamada及其同事报告了一种新的染色体破裂综合征。该患者是一名12岁的日本女孩，来自非相关婚姻，表现出严重的小头畸形，多态且身材矮小。他表现出具有明显的淋巴细胞减少症和免疫球蛋白减少的结合免疫缺陷，并从小就重复了慢性感染。该患者的淋巴细胞的染色体核型为46和XX，但是在放射辐射，结构异常之后，例如染色体型齿轮和泪液经常发生，显示出与Nymyhen综合征中对辐射的敏感性相似的敏感性。但是，在NBS1基因中未发现类似鸟的脸，也未观察到突变。基于上述，我们被诊断出具有新型的Nymyhen综合征变体。然后，该女孩患上恶性淋巴瘤，并强烈怀疑该疾病是一种高度致癌的遗传疾病。这项研究旨在建立患者剥离的成纤维细胞细胞系并阐明疾病的发病机理。这项研究揭示了以下几点。 1。使用逆转录病毒载体与端粒催化亚基HTER一起引入患者皮肤成纤维细胞，然后用SV40病毒感染以建立永生的细胞系。测定所得永生的细胞系通过菌落形成以进行辐射敏感性。已经证实，患者细胞对Nymyhen综合征细胞表现出相似的辐射致命敏感性。 2。使用蛋白质印迹搜索与NBS1相关的各种DNA修复蛋白。未观察到NBS1及其亚基HMRE11和HRAD50的表达或蛋白质大小异常。此外，通过免疫染色可以观察到DNA修复蛋白的核内聚焦，并证实它们俩正常形成核内焦点。 3。目前，正在通过掺入人类染色体库来识别因果染色体来进行功能测试。未来的基因映射是通过功能互补测试预期的。